文档介绍：《生物化学实验》讲义生物化学实验室规则 ,维护课堂秩序,不迟到,不早退,不大声谈笑。 ,严肃认真地按操作规程进行实验,并把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上,文字要简练、准确。完成实验后经教师检查同意,方可离开实验室。 ,仪器、药品摆放整齐。公用试剂用完后,应立即盖严放回原处。勿使试剂、药品洒在实验台面和地上。实验完毕,仪器洗净放好,才能离开实验室。 、试剂和各物品必须注意节约。使用仪器时,应小心仔细,防止损坏仪器。使用贵重精密仪器时,应严格遵守操作规程,发现故障须立即报告教师,不得擅自动手检修。凡违犯操作规程或不听从指导而造成仪器设备损坏等事故,应按有关规定予以处理。 !加热用的电炉应随用随关,严格做到:人在炉火在,人走炉火关。乙醇、丙酮、乙醚等易燃品不能直接加热,并要远离火源操作和放置。实验完毕,应立即拨去电炉开关和关好水笼头,拉下电闸。离开实验室以前应认真、负责地进行检查水电,严防发生安全事故。 ,同时放水冲走。强酸、强碱溶液必须先用水稀释。废纸屑及其他固体废物和带渣滓的废物倒入废品缸内,不能倒入水槽或到处乱扔。 ,未经本室负责教师批准,严禁带出室外。 。值日生的职责是负责当天实验室的卫生、安全和一切服务性的工作,实验完毕后,整理仪器设备,做好清洁卫生,关闭电、水源及门窗, 经指导教师同意,方可离开。 。实验一实验一氨基酸纸层析( 氨基酸纸层析( 3 3 学时) 学时) 层析技术简介:一、发展史: 层析分离技术在 20 世纪初就已得到应用: 1903 年用于植物色素的分离; 1931 年用氧化铝柱分离了胡萝卜素的两种同分异构体; 1944 年出现了以滤纸作为支持物的纸层析。二、定义: 层析技术是利用被分离的混合物中各组分的理化性质( 分子的形状和大小、分子极性、吸附力、分子亲和力、分配系数等) 的不同, 使各组分以不同程度在流动相和固定相中进行分配, 最终达到分离目的。三、层析技术的种类 1 、按流动相的状态分类:( 1 )液相层析(色谱)( 2 )气相层析(色谱); 2 、按固定相的使用形式分类:( 1 )柱层析( 2 )纸层析( 3 )薄层层析( 4 )薄膜层析等; 3 、按分离过程所主要依据的物理化学性质分类:( 1 )吸附层析(2 )分配层析(3 )离子交换层析(4 )凝胶层析(5 )亲和层析等。一、实验目的: 1 、通过氨基酸的分离,学习并掌握纸层析的原理和操作技术; 2 、掌握分配层析法; 3 、掌握影响分配系数的因素。二、实验原理: 纸层析: 是以滤纸作为支持物的分配层析法,是 20 世纪 40 年代发展起来的一种生化分离技术。由于设备简单, 操作方便, 所需样品量少, 分辨力较高等优点而广泛的用于物质的分离, 并可进行定性和定量的分析。缺点是展开时间较长,分辨率低。分配层析法: 是利用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同, 而达到分离目的的一种实验方法。在一定条件下,一种物质在某种溶剂系统中的分配系数是一个常数即α= 溶质在固定相的浓度( Cs)/ 溶质在流动相的浓度( Cl )。溶剂系统: 由有机溶剂和水组成, 水和滤纸纤维素有较强的亲和力, 因而其扩散作用降低形成固定相, 有机溶剂和滤纸亲和力弱, 所以滤纸毛细管中自由流动, 形成流动相, 由于混合液中各种氨基酸的α值不同,其在两相中的分配数量及移动速率(即迁移率 Rf 值)就不同,从而达到分离的目的。移动速率: Rf= 原点到层析点中心的距离/ 原点到溶剂前沿的距离。影响 Rf 值的主要因素: Rf 决定于被分离物质在两相间的分配系数以及两相间的体积比。由于在同一实验条件下, 两相体积比是一常数,所以主要决定于分配系数。不同物质分配系数不同, Rf 也就不同。(1 )物质的结构和分子极性:结构不同极性不同,在两相中的溶解度也就不同,物质的极性决定了物质在水和有机溶剂之间的分配情况,极性大的易溶于水中即固定相中, Rf 小;反之 Rf 则较大; (2) 层析溶剂: 首先, 溶剂的纯度要高, 否则需经预先处理( 酸碱抽提, 重蒸馏, 脱水干燥等); 其次, 溶剂系统选择应考虑被分离的物质在溶剂系统中的 Rf在 ~ , 样品被分离物质的组分的 Rf 之差最好大于 。之间溶质与溶剂间的相互作用; 再次, 有些溶剂系统需必须新鲜配制, 如正丁醇- 甲酸- 水系统久放易引起酯化;最后,溶质和溶剂之间若能形成氢键,对分配系数的影响很大; (3) pH 值:溶剂、滤纸和样品的 pH 值都会影