文档介绍：关于核酸检测技术
第一页，本课件共有140页
核酸检测技术
直接对动植物有害生物基因序列和结构进行测定。
核酸的分离纯化
PCR技术
核酸杂交技术
第二页，本课件共有140页
第1节
核酸的分离纯化
第三页，本课件共有140页
核酸的分离纯化的原则
保持核酸一级结构的完整性
提高核酸制品的纯度
第四页，本课件共有140页
技术路线的设计
第五页，本课件共有140页
破碎细胞的方法
机械 （匀浆、超声破、研磨等）
非机械（化学处理、生化法）
第六页，本课件共有140页
沉淀是浓缩核酸最常用且高效的方法。
优点
缺点
乙醇
对盐类沉淀少，易挥发除去，不影响后续实验
需要量大，低温操作
异丙醇
需体积小，速度快，一般不需低温长时间放置
易使盐类、糖类与DNA共沉淀；异丙醇难以挥发除去
第七页，本课件共有140页
核酸浓度检测与完整性测定方法
浓度测定
紫外分光光度法 260nm
荧光光度法 EB荧光
完整性测定
琼脂糖凝胶电泳法：以EB为示踪剂的核酸凝胶电泳结果为依据。
基因组DN***段如发生降解，电泳图呈拖尾状；
完整的或降解很少的总RNA电泳图谱中，三条带的荧光强度积分应呈特定的比值
第八页，本课件共有140页
问题一：DNA样品不纯
抑制后续酶解和PCR反应
DNA提取常见问题
第九页，本课件共有140页
DNA提取常见问题
问题二： DNA降解
第十页，本课件共有140页