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沙门氏菌检验现用
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沙门氏菌检验现用
沙门氏菌的检验
1．目的
规范沙门氏菌检测方法，使产品检验有据可依。
2．消毒灭菌要求
微生物检测用的玻璃仪器、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。
注：本实验采用湿热灭菌法，吸管、培养皿、培养基等盖好塞子并包好瓶口在高压灭菌锅中按要求的温度和压力灭菌，一般是 121℃（ ）下灭菌 20min。
3．原理
沙门氏菌的检验分四个连续阶段：
4．操作步骤
准备工作
配制实验所需的缓冲蛋白胨水、亚硒酸盐胱氨酸培养基（无需灭菌）、 HE 培养基、三糖铁培养基等，并将准备好的均质杯、吸管、培养皿、大试管等一起灭菌。
前增菌
在无菌环境下，称取 25g 待检样品放入盛有 225ml 灭菌好的缓冲蛋白胨水中，然后放到
36± 1℃的恒温培养箱内进行前增菌 4-6h;
增菌
在无菌环境下，用灭菌好的吸管吸取 10ml 前增菌液接种与 100ml 亚硒酸盐胱氨酸培养基中进行二次增菌，恒温培养箱 36±1℃，培养 18-24h;
分离培养
将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径 3mm的接种环挑取一环，划线于表面无凝结水的 BS和 SS琼脂平板各一个，于 36±1℃培养 18-24h 。观察各个平板上有无典型或可疑沙
门氏菌属的菌落。如无典型或可疑菌落，应再继续培养 24±2h。然后观察培养的平板（黄色的菌落是大肠杆菌；蓝绿色或蓝色，产硫化氢，菌落中心黑色或几乎全黑色为可疑沙门
氏菌）。
沙门氏菌属各亚属在其他选择性琼脂平板的菌落特征
生化实验
用灭菌好的接种针在培养平板上挑取可疑的沙门氏菌单菌落，接种到三糖铁培养基
上，恒温培养箱 36±1℃，培养 18-24h; 典型沙门氏菌培养物斜面显红色 （碱性），底端显黄色（酸性），有气体产生，形成硫化氢（琼脂变黑）。
三糖铁培养基变化表
肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果
同时将三糖铁培养基上可疑的菌株，做生化实验，将可疑的沙门氏菌落分别接种于尿
素、赖氨酸脱羧等发酵管中恒温培养箱 36±1℃，培养 18-24h （根据上表进行判定） , 将可疑的沙门氏菌补做进一步的生化试验，如下表：
三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶培养基筛选
三糖铁琼脂反应
赖氨酸脱羧酶培
斜面
底层
产气
硫化氢
养基
K
A
＋（－）
＋（－）
＋
K
A
＋（－）
－（－）
＋
A
A
＋（－）
＋（－）
＋
可能的菌属
可疑沙门氏菌属
可疑沙门氏菌属
可疑亚利桑那菌
沙门氏菌检验现用
沙门氏菌检验现用
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沙门氏菌检验现用
A A ＋（－） －（＋） －
K K ＋/－ ＋/－ ＋/－
备注： K-- 产碱； A-- 产酸；＋ -- 阳性反应，－—阴性反应，（－）少见反应，＋
非沙门氏菌属
非沙门氏菌属
/ －—阳性