文档介绍：小鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用阐明书
本试剂仅供研究使用 目：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及有关液体样本中胱天蛋白酶9(Casp-9)含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)。用纯化小鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗微孔中依次加入胱天蛋白酶9(Casp-9)，再与HRP标记胱天蛋白酶9(Casp-9)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，通过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶催化下转化成蓝色，并在酸作用下转化成最后黄色。颜色深浅和样品中胱天蛋白酶9(Casp-9)呈正有关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过原则曲线计算样品中小鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)浓度。
试剂盒构成：
试剂盒构成
48孔配备
96孔配备
保存
阐明书
1份
1份
封板膜
2片（48）
2片（96）
密封袋
1个
1个
酶标包被板
1×48
1×96
2-8℃保存
原则品：360 IU/L
×1瓶
×1瓶
2-8℃保存
原则品稀释液
×1瓶
×1瓶
2-8℃保存
酶标试剂
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
样品稀释液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
显色剂A液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
显色剂B液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
终结液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
浓缩洗涤液
（20ml×20倍）×1瓶
（20ml×30倍）×1瓶
2-8℃保存
样本解决及规定：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如浮现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应依照标本规定选取EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应当再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性成分时，用无菌管收集。离心20分钟左右（-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内成分时，用PBS（-）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过重复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成分。离心20分钟左右（-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量PBS，。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后依然保持2-8℃温度。加入一定量PBS（），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，别的冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按有关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即进行实验，可将标本放于-20℃保存，但应避免重复冻融.
7. 不能检测含NaN3样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶（HRP）活性。
操作环节
原则品稀释与加样：在酶标包被板上设原则品孔10孔，在第一、第二孔中分别加原则品100μl，然后在第一、第二孔中加原则品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加原则品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加原则品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加原则品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加原则品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为240IU/L，160IU/L ，80IU/L，40IU/L， 20IU/L）。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，别的各步操作相似）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最后稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将30（48T20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T20倍）倍稀释后备用。
洗涤：小