文档介绍：心血管疾病的实验室评估血脂测定与血脂测定标准化陈文祥王抒(卫生部北京医院/卫生部临床检验中心) 动脉粥样硬化是一种多因素慢性疾病,逆转困难,因此对各种动脉粥样硬化危险因素进行干预,达到一级预防或二级预防的目的,是降低心血管病发病率和死亡率的重要手段。美国于20世纪80年代推出国家胆固醇教育计划(NCEP),已先后三次提出以胆固醇或低密度脂蛋白胆固醇等血脂指标为中心内容的心血管病危险因素干预建议(***治疗计划I~III, ATPIMII),已取得明显成效。我国也于1997年提出第一版血脂异常防治建议,目前正对此建议进行补充和修订工作。对血脂异常等危险因素进行干预,需首先鉴定危险因素的存在, 干预的效果如何也需进行评价,而这些鉴定和评价工作有赖于实验室检测,因此血脂指标的实验室检测是心血管病预防工作的重要环节。上述干预建议采用统一(至少在同一国家内) 血脂水平划分方案,而且不同划分水平(如合适、边缘性高、高等)之间的差距不是很大, 这就要求血脂测定达到一定的准确度,不同实验室间及同一实验室不同时间的测定结果有可比性,即血脂测定做到标准化。本文介绍主要血脂指标的测定方法、血脂测定标准化及与血脂指标测定和应用有关的若干问题。第一节血脂、脂蛋白和载脂蛋白测定广泛意义的血脂可以包括血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇()、载脂蛋白AI(apoAI)、apo B和脂蛋白(a)【Lp (a)】等,这些指标也是我国临床实验室经常测定的动脉粥样硬化危险因素指标,本节简单介绍其检测方法,主要是常规方法及有关问题。一、胆固醇测定血清TC包括分布于各种脂蛋白表面的游离胆固醇和位于脂蛋白内部的胆固醇酯(分别约占TC的30%和70%)。TC测定方法近年来变化不大,有酶法、化学法、色谱法等多种, 其中酶法最为简便,易自动化,目前几乎所有TC常规测定均采用酶法,而其他原理的方法或已很少应用,或仅用于某些特殊情况(如用作参考方法,见第二节)。目前应用最多的酶法测定血清TC的原理是以胆固醇酯酶水解胆固醇酯为游离胆固醇,***和过氧化氢,过氧化氢在过氧化物酶的作用下与酚类或苯***、缩合反应,产生最大吸收波长为500---600 nlTI的醌亚***类化合物(Trinder反应)。酚类或苯*** Trinder反应的双色原。在一定浓度范围内,醌亚***类化合物的浓度与总胆固醇浓度成正比。上述各种酶和显色剂一般组成单一试剂,与血清混合并反应后进行光度分析。目前血清TC 常规测定基本上都采用商品试剂盒(包括试剂和校准物等)在自动生化分析仪上进行。目前不同脂蛋白胆固醇()常规测定中的胆固醇分析也基本上都采用上述原理。血清中的乳糜颗粒、胆红素、抗坏血酸等还原性物质、血红蛋白等有色物质及非胆固醇甾醇为本方法的干扰物质。生理水平的上述物质对本方法的干扰不明显。某些试剂的配方设计和测定方式可不同程度地减小上述物质的干扰。近年有人报道用胆固醇脱氢酶使胆固醇脱氢,同时使烟酰***二核苷酸(NAD)还原为还原型烟酰***二核苷酸(NADH),用紫外分光光度法检测生成的NADH。此法的特点是不受胆红素、抗坏血酸、血红蛋白等物质的干扰。二、甘油三酯测定 TG是甘油的三脂肪酸酯,组成TG的脂肪酸有多种,故TG是一组化合物。血清中除 TG外还存在少量甘油二酯、甘油一酯和游离甘油,正常情况下甘油二酯和甘油一酯之和不足TO的3%, mmol/L。真正意义上的TG不包括甘油二酯、甘油一酯和游离甘油,但目前临床实验室测定的TG多数情况下是总甘油,即TG、甘油二酯、甘油一酯和游离甘油之和,有的测定扣除游离甘油空白。由于TG是混合物,TG重量多数情况下以三油酸甘油酯()计,甘油二酯、甘油一酯和游离甘油也以折合的三油酸甘油酯表示。血清TG测定方法也有酶法、化学法、色谱法等多种,同样酶法是目前普遍采用的TG 常规测定方法。酶法测定血清TG是测定TG的甘油部分,首先用脂肪酶水解TG为游离甘油和脂肪酸。测定甘油的方法多种多样,但目前常用的酶法一般先用甘油激酶和三磷酸腺苷(ATP)将甘油磷酸化,检测生成的磷酸甘油或二磷酸腺苷(ADP)以测定甘油含量。检测磷酸甘油的一种方法是用磷酸甘油氧化酶氧化磷酸甘油产生过氧化氢,用Trinder反应检测生成的过氧化氢。此法可能是目前TG测定的主要方法。检测磷酸甘油的另一种方法是在 NAD存在下用磷酸甘油脱氢酶使磷酸甘油脱氢,同时使NAD还原为NADH,生成的NADH 可直接用紫外分光光度法测定,也可通过心肌黄酶作用下的NADH还原四氮唑类化合物为四氮唑甲簪的反应进行