文档介绍：植物组织或器官中丙二醛含量的测定一、实验目的 。 、实验原理: + 100 C HN S NH O OO H H HN HS NH OO HO OH NNH S O 硫代巴比妥酸 TBA 丙二醛 3,5,5 ′-三***恶唑 2,4- 二***(三甲川) 逆境膜脂的过氧化作用丙二醛酸性棕红色(最大吸收峰在 532nm) 三、实验材料: 受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官(以正常条件下的作为对照): 实验仪器: 紫外可见分光光度计离心机四、实验步骤: ? 1 MDA 的提取称 2g 叶片,加入 10 %三***乙酸(TCA)2ml 及少量石英砂,研磨;进一步加入 8mlTCA 充分研磨,接着把匀浆液以 4000r / min 离心 10min , 其上清液即为 MDA 提取液。? 2 MDA 显色反应及测定取 2ml MDA 提取液(对照组取 2ml 蒸馏水),在加 2ml % TBA 混匀,在试管上加棉塞,置沸水中加热 15min ,迅速拿出水浴锅冷却, 以 4000r / min 离心 15min ,于波长 532nm 和 450nm 下测定 OD 值。五、结果计算?以测得的 OD532 减去 OD600 的非特异吸收值,分别计算衰老和对照组的值。 MDA 浓度(μmol /L)=- D450 、D532 分别代表 450nm 、532nm 波长下的光密度值。六、注意事项: 1. - %的三***乙酸对 MDA — TBA 反应较合适,若高于此浓度,其反应液的非专一性吸收偏高; 2. MDA-TBA 显色反应的加热时间,最好控制沸水浴 10- 15min 之间。时间太短或太长均会引起 532nm 下的光吸收值下降; ,可适当增加离心力及时间。 MDA 与 TBA 的显色反应,当植物组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe 3+(最终浓度为 nmol ·L -1) TBA 显色反应的产物在 532 nm 也有吸收(最大吸收在 450 nm ),当植物处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高,必要时要排除可溶性糖的干扰。