文档介绍：2021年PCR实验报告
2021年PCR实验报告
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2021年PCR实验报告
一般生物学试验汇报
试验名称: 用PCR扩增方法判别不一样物种起源肌肉
一、 特异性目片段DNA扩增
（一）试验原理
聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）是体外酶促合成特异DN***段一个方法, 其基础原理为DNA半保留复制。PCR技术由①高温变性模板 ; ②引物与模板退火; ③引物沿模板延伸这3步反应组成一个循环, 经过数次循环反应, 目DNA得以快速扩增。其关键步骤是: 将模板DNA置于高温下（通常为93℃-94℃）, 使其变性解成单链; 人工合成两个寡核苷酸引物在其适宜复性温度下分别与目基因两条单链互补结合; 热稳定DNA聚合酶（Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物3’端开始掺入, 以目基因为模板按5’→ 3’方向延伸, 合成互补链。
本试验采取物种特异性引物扩增方法来判定3种不一样物种起源肌肉。以不一样物种起源动物DNA为模板, 用物种特异性引物进行PCR扩增, 只有在模板和引物物种相对应情况下才会有特异性条带出现。应用此方法, 能够特异性地检测样品中痕量特定DNA成份。
试验步骤
不一样反应体系配制
按下表将各成份分别加入一做好标识无菌PCR管中, 配制50μlPCR反应体系, 注意酶要最终加, 加完后将PCR管放置在冰上。
10×PCR缓冲液
5μl
5μl
5μl
5μl
5μl
5μl
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dNTP mix(2,5mM each)
4μl
4μl
4μl
4μl
4μl
4μl
模板
DNA1
2μl
2μl
_____
_____
_____
_____
DNA2
_____
_____
2μl
2μl
_____
_____
DNA3
_____
_____
_____
_____
2μl
2μl
引物
Pork1
(10μM）
2μl
_____
2μl
_____
2μl
_____
Pork2
(10μM）
2μl
_____
2μl
_____
2μl
_____
Beef1
(10μM）
_____
2μl
_____
2μl
_____
2μl
Beef2
(10μM）
_____
2μl
_____
2μl
_____
2μl
Taq酶（5U/ μl）
ddH2O
将上述混合液稍加离心, 约10s左右。取下后立刻置于PCR仪中, 盖紧热盖, 定好PCR仪反应程序, 实施扩增程序。
反应程序为:
预变性 94℃ 5min
变 性 94℃ 5s