2022年实验一蛋白质浓度的测定实验报告.doc

文档介绍：蛋白质浓度测定
试验原理
考马斯亮蓝能与蛋白质疏水微区相结合, 这种结合含有高敏感性。考马斯亮蓝G250磷酸溶液呈棕红色, 最大吸收峰在465nm。当她与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色, 其最大吸收峰改变为595nm。考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物高消光效应造成了蛋白质定量测定高敏感性。
在一定范围内, 考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后, 在595nm下, 吸光度与蛋白质含量呈线性关系。故可用于蛋白质浓度测定。
试验设备与试剂
设备: 一般离心机, 721型分光光度计
试剂: 标准蛋白液（100ug/ml）
试验材料
新鲜绿豆芽
试验内容
标准曲线制备
取9支洁净试管, 按表进行编号并加入试剂。
管
试剂
1（空白）
2
3
4
5
6
7
8
9
标准蛋白液/mL
0








%Nacl/mL








0
考马斯亮蓝染液/mL









蛋白质含量/(ug/mL)
0
10
20
30
40
50
60
80
100
样品蛋白测定
样品蛋白液制备
正确称取2g新鲜绿豆芽胚轴部分, 研磨成匀浆, 离心分离（4000r/min,10min）。%nacl定容到10ml。
含量测定
另取两只洁净试管, , , 混匀。室温静置3min, 与波长595nm处比色, 读取吸光度。
试验结果
标准曲线
结果如表所表示, 并以吸光度为纵坐标, 个标准液含量为横坐标做标准曲线。
试管号
1
2
3
4
5
6
7
89
9
蛋白质含量
0
10
20
30