文档介绍：2021年小鼠脾脏细胞原代培养及观察计数实验报告山东大学
2021年小鼠脾脏细胞原代培养及观察计数实验报告山东大学
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2021年小鼠脾脏细胞原代培养及观察计数实验报告山东大学
小鼠脾脏细胞原代培养及观察计数
【试验目】
学****掌握细胞培养基础原理以及具体方法, 并对小鼠脾细胞进行原代培养;
掌握无菌操作具体过程及无菌操作台使用;
学****掌握染色法判别细胞生死状态原理及方法;
学****使用血球计数板对细胞总数及活细胞数进行计数;
【试验原理】
细胞培养
细胞培养指是在无菌条件下, 把动、植物细胞从组织中取出, 在体外模拟体内生理环境, 使离体细胞在体外生长和繁殖, 而且维持其结构和功效一个培养技术。动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。从供体取得组织细胞, 在无菌条件下, 用胰蛋白酶消化或机械分散等方法, 将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞方法称为细胞原代培养。当培养动物细胞生长增殖达成一定密度, 形成致密单层细胞时, 用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞, 从一个容器中以1: 2或其她百分比转移到另一个容器中扩大培养方法, 称为细胞传代培养。传代培养累计次数就是细胞培养代数。
高等生物是由多细胞组成整体, 在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内功效活动是十分困难。但假如把活细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究, 则要方便和简单得多。被培养动物细胞是非常好试验对象和试验研究材料, 对体外培养活细胞进行研究能够帮助人类揭开生、老、病、死规律, 探索优生、抗衰老和防治多种疾病路径和机制, 也能够人为地诱导和改变细胞遗传性状和特征, 使其向有利于人类健康长寿方向发展。所以动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常关键试验手段, 被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。
细胞培养意义:含有其她生物技术无可比拟优点; 培养条件易改变和控制, 便于单因子分析; 便于大家直接对细胞内结构、细胞生长及发育等过程观察; 在生物学各个领域（如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学及病毒学等）已被广泛应用。
细胞培养不足: 在脱离机体复杂环境下, 细胞培养条件与躯体环境有一定距离; 观察到结果有时难以正确反应机体内情况; 细胞培养得到产物少。
培养细胞条件有水质量、无菌环境, 最适温度、渗透压、气体条件、最适PH、营养条件和培养基质等。
细胞死活判定
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细胞生死状态判别方法关键是化学染色法和荧光染色法。
活细胞和死亡细胞在生理技能和性质上关键存在一下差异:
① 细胞膜通透性差异: 活细胞细胞膜是一个选择性膜, 对细胞起保护和屏障作用, 只许可物质选择性地经过; 而细胞死后, 细胞膜受损, 其通透性增加。基于此, 发展出了以台盼蓝、伊红、苯***黑、赤藓红、 ***蓝以及荧光染料碘化丙啶或溴化乙啶等为染料判别细胞生死状态方法, 上述染料能使死亡细胞着色, 而活细胞不被着色。另外, 应用植物质壁分离性质也可判定植物细胞生死状态。活细胞原生质含有选择透过性, 死细胞因