文档介绍：PCR基因扩增
2021/12/17
作者:蒋华云
一、实验目的
通过本实验学****PCR反应的基本原理与实验技术
Date
作者:蒋华云
二、实验原理
PCR是一种由引物介导的选择性体外扩增DNA的方法，
包括三个基本步骤:
变性（Denature）：目的双链DN***段在94℃下解链
退火（Anneal）：两种寡核苷酸引物在适当温度（50℃ 左右）下与模板上的目的序列通过氢键配对
延伸（Extension）：在Taq DNA聚合酶合成DNA的最适温度下，以目的DNA为模板进行合成
由这三个基本步骤组成一轮循环，理论上每一轮循环将使目的DNA扩增一倍，这些经合成产生的DNA又可作为下一轮循环的模板，所以经25～35轮循环就可使DNA扩增达106 倍
Date
作者:蒋华云
5’
3’
5’
3’
Double stranded
DNA template
Region to be amplified
Date
作者:蒋华云
5’
3’
5’
3’
Design primers with
this sequence information
Identical to
this sequence
Reverse complement of this sequence
Double stranded
DNA template
Date
作者:蒋华云
5’
3’
5’
3’
PCR Cycle 1
Primers
Taq
Taq
Double stranded
DNA template
Date
作者:蒋华云
5’
5’
3’
3’
PCR Cycle 1
Denaturation
95 ℃
strands separate
Primers
Taq
Taq
Taq polymerase is thermostable
Date
作者:蒋华云
3’
5’
5’
3’
Annealing
~55 ℃ Primers bind
Taq
Taq
Forward primer anneals to lower strand
Reverse primer anneals to upper strand
PCR Cycle 1
Date
作者:蒋华云
3’
5’
5’
3’
Annealing
~55 ℃
Taq binds
Taq
Taq
PCR Cycle 1
Date
作者:蒋华云
3’
5’
5’
3’
Extension
72 ℃
Taq copies DNA strand dNTPs
Taq
Taq
Taq synthesises DNA in the 5’ to 3’ direction
PCR Cycle 1
Date
作者:蒋华云