文档介绍：关于实验二质粒的酶切和琼脂糖凝胶电泳检测
第一页，本课件共有23页
实验二 质粒的酶切和
琼脂糖凝胶电泳检测
实验目的
实验原理
实验仪器、材料与试剂
实验步骤
实验结果及讨论
第二页，本课件共有23页
一、实验目的
限制性内切酶切割出目的DNA
了解琼脂糖凝胶电泳的原理
掌握琼脂糖凝胶的制作及进行电泳的方法
第三页，本课件共有23页
二、实验原理
利用限制性内切酶具有特定的识别及切割位点，定点切割环状质粒DNA。
琼脂糖凝胶电泳是基因工程操作中常规的实验方法，它能检测少量的DNA（如用肉眼观察，可检测到10 ng的DNA），且检测的范围很广。
第四页，本课件共有23页
琼脂糖凝胶电泳对DNA分子的检测，主要基于在凝胶中加入溴化乙锭，这样溴化乙锭分子就会嵌入DNA分子中形成络合物，使DNA在紫外光下发射很强的荧光，而在紫外光下DNA发出的荧光是可见光。在溴化乙锭足够的情况下，荧光的强度正比于DNA的含量，因而DNA的检测很方便。如将已知大小和浓度的标准样品（Marker）作电泳对照，就可估计出待测样品的大小和浓度。
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三、实验仪器、材料与试剂
仪器
1. 水平式凝胶电泳槽
2. 稳压电泳仪
3. 电炉
4. 紫外检测仪
5. 台式离心机
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材料
实验一中提取的质粒DNA和本实验酶切后的质粒DNA。
试剂
1. 限制性内切酶 EcoR I，HindIII(XholI)
2. 50×TAE电泳缓冲液（）:
Tris 242g
冰醋酸
EDTA（） 100ml
稀释到电泳缓冲液1×TAE
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3. 溴化乙锭溶液 :10mg/ml水溶液，室温，棕色瓶或铝铂纸包装保存。
4. 10×(6×) ×DNA样品上样缓冲液 (Loading Buffer,溴酚蓝指示剂, DNA样品加样缓冲液)
5. 琼脂糖Agarose
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四、 实验步骤
在20μL反应体系中，包括：
质粒KS 16 μL
EcoR I 1μL
Xhol I 1 μL
Buffer H 2μL
ddH2O 0μL
37℃~ 小时。
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或在20μL反应体系中，包括：
质粒pMD18-T 16 μL
EcoR I 1μL
HindIII 1 μL
Buffer M 2μL
ddH2O 0μL
37℃~ 小时。
第十页，本课件共有23页