文档介绍：色谱分析法是分析化学中获得广泛应用的一个重要分支，是一个具有强大生命力的分离分析技术。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。
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高效液相色谱法的特点
一、与经典液相色谱法比较
经典液相（柱）色谱法使用粗粒多孔固定相，装填在大口径、长玻璃柱管内，流动相仅靠重力流经色谱柱，溶质在固定相的传质、扩散速度缓慢，柱入口压力低，仅有低柱效，分析时间冗长。
  高效液相色谱法使用了全多孔微粒固定相，装填在***、短不锈钢柱内，流动相通过高压输液泵进入高柱压的色谱柱，溶质在固定相的传质，扩散速度大大加快，从而在短的分析时间内获得高柱效和高分离能力。
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二、与气相色谱法比较
气相色谱仅能测量在操作温度下可气化且不分解的物质，而对高沸点化合物、非挥发性物质、
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热不稳定物、离子型化合物及高聚物的分离及测量有困难，致使其应用受到了很大的限制。
高效液相色谱法不受样品挥发度和热稳定性的限制，适合分离生物大分子、离子型化合物、不稳定的天然产物以及其他各种高分子化合物等。
据统计，在已知化合物中，能用气相色谱测量的约占20％；能用高效液相色谱测量的达到70％～80％。
三、高效液相色谱法的特点
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高效液相色谱法的分类
按溶质在两相分离过程中的物理化学原理分类
（Adsorption Chromatography）
（Partition Chromatography）
（Ion Chromatography）
（Size Exclusion Chromatography）
（bonded-phase chromatography）
（Affinity Chromatography）
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按分离过程物理化学原理分类的各种液相色谱法的比较
吸附色谱
分配色谱
离子色谱
体积排阻色谱
亲和色谱
固定相
全多孔固体吸附剂
固定液载带在固相基体上
高效微粒离子交换剂
具有不同孔径的多孔性凝胶
多种不同性能的配位体键联在固相基体上
流动相
不同极性有机溶剂
不同极性有机溶剂和水
不同pH值的缓冲溶液
有机溶剂或一定pH值的缓冲溶液
不同pH值的缓冲溶液，可加入改性剂
分离原理
吸附与解吸
溶解与挥发
可逆性的离子交换
多孔凝胶的渗透或过滤
具有锁匙结构络合物的可逆性离解
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高效液相色谱仪简介
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贮液罐(流动相)
一、流动相脱气
（1）吹氦脱气法
（2）加热回流法
（3）抽真空脱气法
（4）超声波脱气法
（5）在线真空脱气法
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高压输液泵及梯度洗脱装置
一、高压输液泵
高压输液泵可以分为以下两类：
1．恒流泵：可输出恒定体积流量的流动相。
（1）注射式泵（又称注射式螺杆泵）
（2）往复型泵
2．恒压泵：恒压泵又称气动放大泵，是输出恒定压力的泵。
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二、梯度洗脱装置
1．梯度洗脱（gradient elution）又称为梯度淋洗或程序洗脱。在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。
2．梯度洗脱特点：提高柱效以及改善检测器的灵敏度。
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