SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳1p.ppt

文档介绍：SDS-聚丙烯酰***凝胶电泳
SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE
一、什么是SDS？
十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS)
是一种阴离子去污剂。它在水溶液中以单体
（monomer）和分子团（micellae）的混合形
式存在。
SDS的作用
破坏蛋白质分子之间以及其他物质分子之间的非共价键，使蛋白质变性而改变原有的构象，保证蛋白质分子与SDS充分结合而形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物。
1、SDS 阴离子去污剂 变性剂 助溶性试剂 断裂分子内和分子间的氢键 分子去折叠 破坏蛋白质分子的二级和三级结构
2、强还原剂 巯基乙醇（β-mercaptoethanal）  二硫苏糖醇（dithiothreitol，DTT） 使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂。
SDS和还原剂的作用：（1）分子被解聚或组成它们的多肽键（2）氨基酸侧链与SDS充分结合形成带负  电荷的蛋白质-SDS胶束。（3）蛋白质-SDS胶束所带的负电荷大大超  过了蛋白质分子原有的电荷量，消除 了不同分子之间原有的电荷差异。
蛋白质-SDS胶束的特点（1）形状像一个长椭圆棒（2）短轴对不同的蛋白质亚基-SDS胶束基本上是相同的。（3）长轴的长度则与亚基分子量的大小成正比。
胶束在SDS-PAGE系统中的电泳迁移率不再受蛋白质原有电荷的影响，而主要取决于椭圆棒的长轴长度，即蛋白质或亚基分子量的大小。 当蛋白质的分子量在15KD—200KD之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系
3、影响SDS电泳的关键因素（1） 溶液中SDS单体浓度 大多数蛋白质与SDS结合的重量比为1：（2） 样品缓冲液的离子强度 低离子强度的溶液中，SDS单体才具有较高的平衡浓度。