文档介绍：血清丙氨酸氨基转移酶活性测定（改良赖氏法）
三峡大学医学院生物化学教研室
临床指标的检测
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【目的要求】
临床意义
谷丙转氨酶(Glutamic pyruvic Transaminase，GPT)
丙氨酸氨基转移酶(Alanine Transaminase，ALT)
ALT(GPT)广泛存在于机体各种组织中，但在肝细胞中含量最多，当肝脏有病变，特别是急性肝炎及肝细胞坏死，血清中谷丙转氨酶活性显著升高。在肝癌、肝硬变以及胆道疾病时，此酶活性也可中度或轻度增高。
在紫外分光光度计中，1ml血清(反应溶液总量为3ml)在340nm波长下，，在25℃，1分钟内生成的***酸，在乳酸氢酶催化下，使NADH+H+变成NAD+，。
卡门氏单位的定义为：
丙氨酸 + α-***戊二酸
谷氨酸 + ***酸
GPT
乳酸氢酶
NAD+ +乳酸
NADH+H+
丙氨酸 + α-***戊二酸
谷氨酸 + ***酸
GPT
乳酸氢酶
NAD+ +乳酸
NADH+H+
改良赖氏法
显色反应
分光光度法
赖氏法没有制定自身的单位定义，而是以实验数据套用卡门氏单位作表示的。
血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α-***戊二酸生成谷氨酸和***酸：
【实验原理】
0
1
2
3
4
5
***酸标准液(ml)

ALT底物试剂(ml)

(ml)

相当于GPT活性(卡门氏单位)

28
57
97
150
200
37℃水浴预温5分钟，各管加2,4-，再在37℃水浴中放置20分钟后， NaOH溶液5ml，混匀放置10分钟后，以蒸馏水调零点，用520nm波长比色，读取各管光密。.
各管的读数均减去对照管(O管)的光密度，然后以光密度值为纵坐标，各管相应的转氨酶活性单位为横坐标，绘制标准曲线。
实验操作
1. 标准曲线的制作:
T
C
血清(ml)

—
ALT底物液(ml)

混匀后，置37℃水浴中保温30分钟
2，4-二硝基苯肼液(ml)

混匀后，置37℃水浴中保温30分钟
血清(ml)
—

NaOH(ml)

：测定前将底物缓冲液在37℃水浴中预温5分钟，再按下表操作。
混匀，在室温中放置10分钟，以蒸馏水调零点，用520nm波长比色，读取光密度。用T-C管的光密度查标准曲线，即得到待测血清中所含ALT的酶活性。
参考值： 5~25卡门氏单位
【临床意义】
肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细胞受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清中ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要指标之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒性肝细胞坏死，中等程度增高见于肝癌、肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞，轻度增高则见于阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、多发性肌炎亦可引起转氨酶活性升高。
【思考题】
？
？为什么要避免溶血？