文档介绍：关于实验十三酶联免疫分析
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一、 ELISA 的发展历程
免疫酶标记技术是继免疫荧光抗体技术和放射免疫分析之后发展起来的一新型血清学技术。
1966年,Nakane和Avrameas等分别报道用酶代替荧光素标记抗体,建立了酶标抗体技术,用于生物组织中抗原的定位和鉴定。
1971年,Engvall,Van Weemen 等报道了酶联免疫吸附试验,从而建立了酶标抗体的定量检测技术。
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20世纪80年代,酶标记抗体检测和鉴定蛋白质分子的免疫转印技术问世。
目前,免疫酶标记技术已成为免疫诊断、检测和分子生物学研究中应用最广泛的免疫学方法之一。
酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay),简称ELISA。
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二、ELISA 的原理
抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合
基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记
结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性
酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留其酶的活性。
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检测过程
包被
封闭
受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应
加入酶标记抗原或抗体
加入酶反应的底物
底物被酶催化成为有色产物
进行定性或定量分析
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三、ELISA的类型
ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂:
(1)固相抗原或抗体,即“免疫吸附剂”;
(2)酶标记抗原或抗体,称为“结合物”;
(3)酶反应的底物。
可设计出各种不同类型的检测方法。
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双抗体夹心法示意图
固相载体
抗体
抗原
酶
抗体
酶标记抗体
。
,则结合
为抗原抗体复合物。
,则结合
为抗体-抗原-酶标记抗体复合
物。
。
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双抗原夹心法示意图
。
,则结合
为抗原抗体复合物。
,则结合
为抗原-抗体-酶标记抗原复合
物。
。
酶
抗原
酶标记
抗原
抗体
抗原
固相载体
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酶
抗抗体
酶标记
抗抗体
抗体
抗原
固相载体
。
,则结合
为抗原抗体复合物。
,则结合为抗原-抗体-酶标记抗抗体复合物。
。
间接法示意图
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捕捉法示意图
酶
抗体
酶标记
抗体
抗原
抗抗体
固相载体
抗体
。
,则结合
为抗抗体-抗体复合物。
3. 加入抗原及酶标记抗体,则结合为抗抗体-抗体-抗原-酶标记抗体复合物。
。
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