文档介绍：关于实验四血凝和血凝抑制试验
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一、实验目的
掌握血凝和血凝抑制试验的原理,以及使用该试验测定血清抗体水平的操作步骤和结果判定方法。
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二、实验原理(一)血凝试验(HA)
有些病毒能够促使某些动物(如鸡、鹅、豚鼠、绵羊)和人的红细胞发生凝集,这就是红细胞凝集现象,称做血凝试验。
病毒凝集红细胞是一种较为普遍的现象,可以作为病毒鉴定的一个指标。
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HA试验的原理图
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病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒结合较密切,不经特殊化学方法处理不能分开。例如流感、腮腺炎、新城疫等病毒,病毒游离下来后,红细胞不能再次被凝集。
病毒凝集红细胞可以分为3种类型
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病毒血凝素与完整成熟的病毒颗粒易于分开,血凝素呈游离状态,例如天花、牛痘、鼠痘等病毒,它们的凝集现象是可逆的。
象各种脑炎病毒、口蹄疫病毒等,凝集红细胞的条件很严格,对红细胞的种类有很严格的选择,同时还要掌握反应的pH和温度等。
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(二)血凝抑制试验(HI)
当病毒悬液中加入特异性抗体时,这种红细胞凝集的现象就被抑制,称做红细胞凝集抑制试验,也叫血凝抑制试验。
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HI试验的原理图
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三、试验材料
鸡新城疫病毒:鸡新城疫弱毒株(Lasota)接种鸡胚、收获尿囊液制备。
鸡红细胞:采集健康鸡血液,以阿氏液抗凝,以生理盐水洗涤3~5次,将血浆、白细胞等充分洗去,用生理盐水配置成1%红细胞悬液使用。
%生理盐水。
被检血清,采自被检鸡的血清。
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四、操作步骤(一)血凝试验(HA)
在血凝板第一排的1~12孔加入50μl生理盐水。
在第1孔中加入50μl病毒抗原,反复吸取混匀后吸50μl到第2孔,如此倍比稀释直到第10孔,混匀后弃50μl;最后两孔(11、12)为细胞对照。
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