文档介绍：关于电泳分离蛋白质与蛋白质免疫印迹
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蛋白免疫印迹杂交（Western Blot ）是将蛋白样本通过聚丙烯酰***电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。WB是进行蛋白质分析最流行和成熟的技术之一。
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原理
聚丙烯酰***凝胶是由单体丙烯酰***(Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰***(Bis)在加速剂N，N，N，N—四***乙二***(简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(简称AP)作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰***凝胶电泳(PAGE)。
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30%丙烯酰***的配制
1、称量Acrylamide290g，Bis10 g，置于1 L烧杯中
2、向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3、 加去离子水将溶液定容至1 L， mm滤膜滤去杂质。
4. 于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙烯酰***具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套、口罩等。聚丙烯酰***无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。
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凝胶浓度(T)的选择与被分离物质分子量密切相关。
分子量范围与凝胶浓度的关系
分子量范围 适用的凝胶浓度/(%)
蛋 白 质
10KD 20-30
1O-40KD 15-20
1O-100KD 10-15
100KD 5-10
500KD 2-5
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分离胶的聚合（12%）
5ml体系
蒸馏水
30%丙烯酰***
Tris-SDS
10%AP 25ul
TEMED 5ul
上层加异丙醇压胶，室温一小时
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积层胶的聚合（5%）
蒸馏水
30%丙烯酰***
Tris-SDS
10%AP
TEMED
室温一小时
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