文档介绍：第四章 电泳技术
概述
基本原理
醋酸纤维薄膜电泳
琼脂糖凝胶电泳
聚丙烯酰***凝胶电泳（PAGE）
等点聚焦（IEF）
电泳后大分子的检测
第三章 电泳技术
定义:
电泳(electrophoresis)是电解质在直流电场的 作用下，正离子向负极、负离子向正极移动的现象
特点:
凡带电物质均可用此法进行定性、定量分析样品
样品用量极少，
设备简单，
可在常温下进行，
操作简便省时，
分辨率高。
概 论
第三章 电泳技术
分类：
纸电泳
醋酸纤维薄膜电泳
琼脂糖凝胶电泳
聚丙烯酰***凝胶电泳
概 论
自由电泳: 不用支持物
区带电泳: 有支持物
按有无支持物：
按不同支持物：
第三章 电泳技术
二. 迁移速率的主要影响因素
第一节 基本原理
带电粒子的性质：颗粒带静电荷多、直径小、近球形，泳动速度越快，反之越慢。
电场强度：带电粒子迁移速度与电场强度成正比。
溶液的pH：pH决定了带电粒子解离的程度, 离等电点远，带净电荷越多，电泳速度越快。
溶液的离子强度：离子强度越高，带电粒子泳动速度越慢，反之越快。
电渗作用：电渗是指在电场下，液体对固体支持物的相对移动速度。若样品泳动的方向与电渗方向一致，则加快样品的表观迁移速率。
第三章 电泳技术
优点：
电泳区带界限清晰
通电时间较短（20min~1h）
对各种蛋白质基本没吸收，无拖尾现象
不吸附染料
第二节 醋酸纤维薄膜电泳
概念:
醋酸纤维薄膜（CAM）是一种由醋酸纤维加工制成的一种细密且薄的微孔膜。醋酸纤维薄膜电泳就是以醋酸纤维薄膜支持体的电泳技术。
缺点：
分辨率低、样品用样很少不易制备。
第三章 电泳技术
膜的性质
缓冲溶液的组成、PH值和浓度
电流和有效电压
电泳的时间和温度
电泳槽的密封性
第二节 醋酸纤维薄膜电泳
电泳影响因素 ：
缓冲液的选择：
浓度太低，则区带宽度增大；太高，则区带不易分离
样品含盐量高时，采用挥发性缓冲液
第三章 电泳技术
第二节 醋酸纤维薄膜电泳
结果不满意或失败的原因分析
醋酸纤维薄膜：过分干燥；弯曲；表面缓冲液过多。
缓冲溶液：浓度过高；长时间多次使用浓度改变。
样品和加样：样品量太多；加样不整齐；起始 位置错误。
电泳条件：时间；电泳槽密闭性；电流；温度。
染色和透明：染色液多次使用，PH值改变；未干 燥就
进行透明处理。
操作步骤:
点样 电泳 染色 漂洗 透明 测定光密度
第三章 电泳技术
优点：
第三节 琼脂糖凝胶电泳
概念:
对蛋白质的吸附系数极微
琼脂糖作为支持体有均匀、区带整齐、分辨率高、重复性好等优点
电泳速度快
透明而不吸收紫外线
区带可染色，
样品易回收，有利于制备
琼脂糖凝胶电泳是以琼脂糖为凝胶支持体的电泳技术。琼脂糖就是从琼脂中提取有D-半乳糖和3、6-脱水-L半乳糖结合的链状多糖。
第三章 电泳技术
PH值：6~9
离子强度：~
常用的缓冲液：硼酸盐缓冲液、巴比妥缓冲液
第三节 琼脂糖凝胶电泳
缓冲液：
应用：
抗体抗原反应的分析
抗体的分离
缺点：
琼脂糖含较多硫酸根，电渗量大。
第三章 电泳技术
第四节聚丙烯酰***凝胶电泳（PAGE）
原理:
PAGE是以聚丙烯酰***为支持介质，根据被分离物质的分子大小和电荷多少进行分离。聚丙烯酰***是由单体丙烯酰***和交联N，N’-聚合而成的大分子。此聚合过程需催化剂,包括引发剂和加速剂，引发剂常为过硫酸铵，加速剂为四***乙二铵(TEMED) 。凝胶浓度过高凝胶硬而脆，易破碎，反之，凝胶稀软不易操作。