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文档介绍：大肠杆菌感受态细胞制备
大肠杆菌感受态细胞制备
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大肠杆菌感受态细胞制备
大肠杆菌感觉态细胞的制备
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分类： 细胞技术 > 感觉态细胞
根源：
实验管理实验纲要
大肠杆菌感觉态细胞的 CaCl2 法制备及质粒转变
实验原理
处于对数生长久的细菌经 CaCl2 办理后接受外源 DNA 的能力明显增添。细菌处于简单汲取外源 DNA 的状态叫感觉态。
在自然条件下， 好多质粒都可经过细菌接合作用转移到新的宿主内， 但在人工建立的质粒载体中，一般缺少此种转移所必要的 mob 基因，所以不可以自行达成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。 如需将质粒载体转移进受体细菌， 需引诱受体细菌产生一种短暂的感觉态，摄入外源 DNA 。

以
大肠杆菌感受态细胞制备
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大肠杆菌感受态细胞制备
转变（ Transformation ）是将外源 DNA 分子引入受体细胞，使之获取新的遗传性状的一种
手段， 它是微生物遗传、 分子遗传、 基因工程等研究领域的基本实验技术。
转变过程所用的
受体细胞一般是限制修饰系统缺点的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体
（R-,M- ），它能够容忍外源
DNA 分子进入体内并稳固地遗传给后辈。受体细胞经过一些
特别方法（如电击法， CaCl2
，RbCl(KCl) 等化学试剂法）的办理后，细胞膜的通透性发生
了临时性的改变，成为能同意外源
DNA 分子进入的感觉态细胞 （ Compenent cells ）。进入
受体细胞的 DNA 分子经过复制、 表达实现遗传信息的转移，
使受体细胞出现新的遗传性状。
将经过转变后的细胞在挑选培育基中培育，即可挑选出转变子（
Transformant ，即带有异
源 DNA 分子的受体细胞）。当前常用的感觉态细胞制备方法有
CaCl2 和 RbCl(KCl) 法，
RbCl(KCl) 法制备的感觉态细胞转变效率较高，但
CaCl2 法简易易行，且其转变效率完整可
以知足一般实验的要求， 制备出的感觉态细胞临时不用时，
可加入占整体积
15%的无菌甘油
于-70 ℃保留（半年），所以
CaCl2 法使用更宽泛。
主要试剂
溶液
(2)LB 液体培育基
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(3)30% 甘油： 30mL 甘油溶于 100mL 蒸馏水，高压灭菌。
主要设施
超净工作台
冷冻离心计
恒温摇床
－ 70 ℃冰箱
(5)10mL 移液管
吸耳球
(7)1mL 、200 μL移液枪（配套枪头）
(8)50mL 离心管
离心管
实验资料
大肠杆菌 DH5α （R- ， M- ， Amp- ）
实验步骤
（一）受体菌的培育
大肠杆菌感受态细胞