文档介绍：高等生物化学主讲:董主讲:董发发才才植物逆境生物学重点实验室植物逆境生物学重点实验室生命科学学院生命科学学院提纲Ⅰ、蛋白质学专题Ⅱ、酶学专题Ⅲ、细胞信号转导专题Ⅳ、代谢专题Ⅴ、核酸专题Ⅵ、基因表达调控专题Ⅰ、蛋白质学专题 1. 蛋白质的性质及分离纯化技术 2. 蛋白质高级结构形成的分子机理 3. 蛋白质的结构与功能 1. 蛋白质的性质及相关分离纯化技术蛋白质为***电解质。在等电点时,静电荷为零◆在电场中不移动; ◆生物学活性最小; ◆蛋白质的溶解度最小。(COO - )m (NH 3 + )n m>n 带负电荷 m<n 带正电荷 m=n 净电荷为零 蛋白质的性质 1. 蛋白质的性质及相关分离纯化技术蛋白质为大分子,其溶液具有胶体溶液的典型性质,如丁达尔现象、布郎运动等。?蛋白质溶液为亲水溶胶体系,其稳定因素:水化膜、电荷和布朗运动。?改变溶液的条件,将影响蛋白质的溶解性质。在适当的条件下,蛋白质能够从溶液中沉淀出来。+ + + ++ ++ ++ + + + + ++ ++ + + ++ ++ ++ + + + + ++ + 等点电时的蛋白质(亲水胶体) 带负电荷蛋白质(亲水胶体) 脱水脱水脱水带负电荷蛋白质(疏水胶体) 不稳定蛋白颗粒不稳定蛋白颗粒阴离子阳离***酸酸蛋白质聚集沉淀碱+ ++ + 水化膜带正电荷蛋白质(疏水胶体) 水化膜带正电荷蛋白质(亲水胶体) 常用的蛋白质分离纯化技术溶解度盐析、等电点沉淀、有机溶剂沉淀分子大小透析、超过滤密度梯度离心、凝胶过滤带电特性电泳、离子交换层析吸附特性吸附层析对配体分子的亲和性依据性质方法用于粗分用于细分亲和层析、金属螯合层析分配层析 亲和层析( Affinity Chromatography) ?许多物质都具有和某化合物发生特异性可逆结合的特性。例如:酶与辅酶或酶与底物(产物或竞争性抑制剂等),抗原与抗体,凝集素与受体,维生素与结合蛋白,凝集素与多糖(或糖蛋白、细胞表面受体),核酸与互补链(或组蛋白、核酸多聚酶、结合蛋白)以及细胞与细胞表面特异蛋白(或凝集素)等。 1. 2 亲和层析( Affinity Chromatography) ?亲和层析的原理: 亲和层析法就是利用化学方法将可与待分离物质可逆性特异结合的化合物(称配体)连接到某种固相载体上,并将载有配体的固相载体装柱,当待提纯的生物大分子通过此层析柱时,此生物大分子便与载体上的配体特异的结合而留在柱上,其他物质则被冲洗出去。然后再用适当方法使这种生物大分子从配体上分离并洗脱下来,从而达到分离提纯的目的。 亲和层析( Affinity Chromatography) 配体蛋白质蛋白质和配体复合物交联试剂载体配体载体与配体交联体杂质杂质游离配体