文档介绍：荧光免疫层析技术的基本原理
层析法(chromatography)的原理是利用混合物中各组分的物理性质之差(如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等)而建立来的一种分离技术。
层析系统是由固定相(stationary phase)和流动(Mobile Phase)相组成。
第一页，共43页。
固定相是固体物质或固定于固体物质上的成分。
流动相是可以流动的物质，如水或各种溶剂。
层析过程：当待分离混合物随流动相通过固定相时，由于混合物各组分的理化性质的差异，与固定相相互作用弱的组分随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移的速度快；与固定相相互作用强的组分向前移动的速度慢。从而实现混合物中各组分的分离。
第二页，共43页。
免疫层析法
免疫层析技术是建立在层析技术和抗原一抗体特异性免疫反应基础上的一项新兴免疫检测技术。
第三页，共43页。
免疫层析技术以固定有检测线和控制线的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，通过毛细作用使待测物在层析条上移动。
待测物在T线处发生特异性免疫反应。
游离物在C线处发生免疫反应。
待测物
层析方向
免疫反应
T
C
免疫层析技术基本原理示意图
第四页，共43页。
荧光（fluorescence）
荧光物质吸收激发光的能量后，电子从基态跃迁到激发态，当其回复至基态时，以发射光形式释放出能量，称为荧光。
发射光谱和激发光谱
发射光谱是指固定激发波长，在不同波长下记录的样品发射荧光的强度。
激发光谱是指固定检测发射波长，用不同波长的激发光激发样品记录的相应的荧光发射强度。
第五页，共43页。
荧光效率
定义:荧光物质分子将光能转变成荧光的百分率
计算公式:
荧光效率=
荧光寿命
定义:荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定程度时所用的时间。
各种荧光物质的荧光寿命不同。
第六页，共43页。
荧光淬灭
定义:荧光物质在某些理化因素作用下，发射荧光减弱甚至消退称为荧光淬灭。
引起荧光淬灭的因素：有如紫外线照射、高温、某些硝基化合物、重氮化合物等。
第七页，共43页。
免疫层析技术以固定有检测线和控制线的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，通过毛细作用使待测物在层析条上移动。
待测物在T线处发生特异性免疫反应。
游离物在C线处发生免疫反应。
待测物
层析方向
免疫反应
T
C
免疫层析技术基本原理示意图
第八页，共43页。
常用荧光免疫层析法
夹心法
竞争法
双抗原夹心法
双抗体夹心法
第九页，共43页。
竞争法
待测物中的某种抗原与T（检测线）线处同种抗原竞争性地与标记抗体相结合的过程。
第十页，共43页。