血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量实验报告.doc

文档介绍：.
1 / 5
生物化学实验报告
姓 名：
学 号：
专业年级：
组 别：
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量
实验日期
实验地点
合作者
指导老师
评分
教师签名
批改日期
实验目的
；
；
。
二、实验原理
,。,在电场中向正极移动。由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同,在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白〔Albumin>、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。
、分子量及含量
血清蛋白质 等电点 分子量 占总蛋白的％
.
3 / 5
清蛋白 69,000 57～72
α1－球蛋白 200,000 2～5
α2－球蛋白 300,000 4～9
β－球蛋白 90,000～150,000 ～12
γ－球蛋白 ～ 156,000～950,000 12～20
缓冲液pH=,pI＜pH。
血清蛋白带负电荷,在电场中向正极移动。
预测血清蛋白电泳区带图
血清蛋白依次分为清蛋白,球蛋白的α1、α2、β、γ五个区带
.①膜条经过氨基黑10B染色后显出清晰色带；②各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比；③可将各色带剪开,分别溶于碱性溶液中；④用分光光度法计算各种蛋白质的百分数。
三、材料与方法：
：
：①样品：健康人血清〔新鲜、无溶血；②巴比妥-巴比妥钠缓冲液〔,；③氨基黑10B染色液；④漂洗液；⑤洗脱液：。
：①V-1100分光光度计〔×1；②恒温水浴箱〔×1；③试管〔×6、试管架〔×1；④1000μL加样枪〔×1、加样枪架〔×1；⑤醋酸纤维薄膜〔2cm*8cm,厚度120μm；⑥培养皿〔×5；⑦点样器或载玻片〔×1；⑧平头镊子〔×2；⑨剪刀〔×1；⑩电泳槽〔×1；⑪直流稳压电泳仪〔×1

准备与点样：①取2×8cm的膜条；②；③充分浸透在巴比妥缓冲液中；
.
3 / 5
④取出膜条,用滤纸吸去多余的缓冲液；⑤点样器下端粘上薄层血清；⑥垂直点样。
点样示意图：
注意：点样线尽量点得细窄而均匀。
+
——
8cmm
2cm
点样