文档介绍：Part I T 细胞表型测定(一) Part II 小鼠脾细胞分离技术实实验验一一潍坊医学院免疫学教研室林志娟 Tel :8462530 Email : ******@wfmc. Part I T 细胞表型测定(一) --- 免疫细胞的分离、细胞涂片、固定及保存【原理】?T细胞是一个复杂的,不均一的整体,根据其发育的不同阶段,表面标记以及功能,可将其分为不同的亚群。 T细胞介导细胞免疫应答,并且对 B细胞介导的体液免疫应答起到辅助和调节作用。?T细胞表面标志的检测,有助于了解机体的细胞免疫功能,对免疫缺陷病、肿瘤、自身免疫性疾病、病毒感染、移植排斥反应等疾病的诊断、分型、预后和疗效观察有着重要的意义。?共有标志: CD3 + --总T细胞?特有标志: CD4 +T细胞--辅助细胞, CD8 +T细胞--杀伤细胞。 T淋巴细胞表面标志外周血正常值? CD3:60~80% ; CD4:35~55% ; CD8:20%~30% ? CD4/CD8: 约 ~ – CD4/CD8 < : ①免疫缺陷病,如艾滋病≤ ;②恶性肿瘤; ③再生障碍性贫血; ④某些病毒感染。– CD4/CD8 > : ①自身免疫性疾病,如 SLE 、类风湿关节炎等。 SABC-AP 法测定 T细胞亚群? SABC :链酶亲和素-生物素–链酶亲和素: 一种糖蛋白,可由蛋清中提取。分子量 60kD ,每个分子由 4个亚基组成,可以和4个生物素分子结合。亲和素与生物素一经结合就极为稳定,形成一种类似晶格的复合体。? AP :碱性磷酸酶。酶标生物素+ 亲合素 A+B T cell 待测 T细胞 CD 分子(???) 一抗二抗(碱性磷酸酶的) 底物实验基本流程间接 SABC-AP 法---- T 细胞亚群检测淋巴细胞+小鼠抗人 CD 3 /CD 4 /CD 8分子单克隆抗体(一抗) 二抗(生物素化) 标有 AP 的 SABC 酶底物显色剂( BCIP/NBT ) 酶将底物催化显色,阳性细胞膜上显色。此为间接法。直接法:不用二抗,将 SABC 物直接标记于一抗。(一抗价格昂贵) SABC 系统对抗原抗体反应起到放大作用,提高反应的敏感性。