文档介绍：关于荧光定量核酸检测技术
第一页，本课件共有36页
主要表现为PCR产物分析手段落后：
琼脂糖凝胶电泳法只能判断产物片段大小，并不能鉴别产物特异性。造成传统PCR检测缺点非特异性难以判断、假阳性多和重复性差等。
实验室管理制度落后；
人员培训水平落后；
国内PCR市场存在的问题
第二页，本课件共有36页
反相膜杂交技术复星
微孔板杂交技术复星、华美、复华、
浩源、锦宏
荧光PCR技术复星、达安、匹基
国内发展的核酸检测新技术
第三页，本课件共有36页
反相膜杂交技术原理
首先将特异性探针交联在固相载体膜上，这时载体膜以及膜上的探针相当于固定相，当膜条的一端与带有杂交反应物的液面接触时，带有生物素标记的基因片段、标记酶、酶底物依次通过这个固定点时，其表现的效应行为类似于过滤或者是亲和层析，这时探针有机会与流动相中的靶序列充分作用特异性结合（杂交），再经过酶显色最终显示出蓝紫色斑点。
第四页，本课件共有36页
反相膜杂交原理示意图
第五页，本课件共有36页
主要优点：；；
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主要缺点：只能进行半定量操作
第六页，本课件共有36页
微孔板杂交技术原理
具体来讲，用生物素（Biotin）标记的PCR扩增产物，与固定在酶标板上的链霉亲合素（Streptavidin，SA）结合，再与抗原标记的特异性HBV探针进行正向法杂交。产物通过探针连接的抗体酶识别基团和标记碱性磷酸酶的抗体特异结合后，酶催化底物，在酶标板中显出颜色，通过酶标仪读取光吸收值。
第七页，本课件共有36页
微孔板杂交技术原理示意图
第八页，本课件共有36页
主要优点：
1. 杂交部分操作类似于ELISA，实验人员较熟悉；
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主要缺点：
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荧光PCR技术原理
荧光PCR试剂比常规PCR试剂多一个寡聚核苷酸探针，这个探针带有一个荧光发光分子和一个荧光淬灭分子，完整的探针在激发光激发下，发光分子所产生的荧光被淬灭分子全部吸收，样品无荧光。而PCR过程中。Taq酶分子在链延长过程中可以通过自身的5’ 3’核酸外切酶降解与模板结合的特异性荧光探针，使得荧光发光分子从探针上切下来而与荧光淬灭分子分开，从而在激发光激发下产生特定波长的荧光，这种荧光随着PCR扩增过程而动态增强。
第十页，本课件共有36页