文档介绍：1 毕业论文实验报告学生姓名:石书鹏学号: 20080357 学院:生命科学与技术学院专业:08生物工程 2班论文题目:木瓜多糖的提取工艺研究指导教师:吴耀辉副教授评阅教师: 王卫讲师 2012 年4月 20日 2 本课题要研究或解决的问题和拟采用的研究手段(途径): 本实验对木瓜中水溶性多糖的提取工艺进行了研究,多糖类化合物具有强亲水性, 极易溶于水,和在亲水性比较强的乙醇中也难于溶解的性质,确定采用水提醇沉(水作为溶剂,乙醇来沉淀多糖)的方法提取多糖。分析提取时间、提取温度、固液比、提取次数对多糖提取率的影响,确定其最佳工艺条件。并且对多糖的抗氧活性进行探讨,为木瓜的综合利用提供依据。 1 材料与仪器 原料新鲜木瓜 试剂 95% 乙醇,无水乙醇(分析纯),苯酚(分析纯),浓硫酸(分析纯) , 蒸馏水,葡萄糖(分析纯)等 仪器电子天平,粉碎机,鼓风干燥机,布氏漏斗,高速离心机,旋转蒸发仪, 恒温水浴锅, 752C 紫外分光光度计,滴管,移液管,漏斗,烧杯,滴定管,锥形瓶等。 2 实验方法 粗多糖提取及纯化步骤 木瓜处理新鲜木瓜,洗净后,在温度 50℃下烘干,经粉碎机粉碎后过 60目筛,收集粉末。 浸提称取一定量的木瓜粉加入适量蒸馏水,在设定条件下恒温浸提,并不断搅拌。 过滤离心将提取液用滤纸进行抽滤,弃掉滤渣,得澄清浸提液。浸提液用台式高速离心机进行离心 5min ,转速 3500 r/min 。 浓缩将离心后的浸提液放入旋转蒸发仪中浓缩到原体积的 1/5 。 3 醇沉将浓缩后的提取液加入 4倍体积的 95%的乙醇溶液中,静置 24h以上。 离心将用醇沉淀的多糖液离心,并用无水乙醇洗涤 2 次~ 3 次,再次离心(转速 3500 r/min ,时间 5min ),收集沉淀物。 粗多糖的含量测定方法 葡萄糖标准曲线的绘制精确取称 110 ℃干燥至恒重的无水葡萄糖标准品 25mg,置于 250 ml容量瓶中,制得浓度为 mg/ml 的葡萄糖标准溶液,准确移取标准溶液 ml、 ml、 ml、 ml、 ml、 ml、 ml、 ml、 ml、 ml、 ml浓度为 mg/ml 的葡萄糖溶液,分置于试管中,各加蒸馏水补足至每管 ml 。在各管中加入 显色液,然后振荡混匀,置于沸水浴中加热 30-35min ,流水冷却,于波长 490 nm 处测定吸光度值。以吸光值 A 为纵坐标溶液浓度(mg/ml) 为横坐标绘制标准曲线。 粗多糖含量的测定将纯化后的木瓜多糖粗品溶解,定容到 100 ml。用移液管移取 ml样液置于试管中,再用移液管加入显色液 5ml ,于沸水浴中加热 30-35 min 后于波长为 490 nm的分光光度计中测量吸光度。根据标准曲线、回归方程计算粗多糖含量,再由含量求出木瓜竹叶中多糖的含量。计算公式为: C×V×n 木瓜多糖提取率=×100% (1) m 式中: C—提取液中木瓜多糖的浓度( g/ml ) m—称取的木瓜质量( g) n—稀释倍数 V—粗多糖( m1) 3实验结果 4 葡萄糖标准曲线的绘制表1 葡萄糖浓度与吸光度的关系葡萄糖浓度 mg/ml 吸光度/A 根据表 1的数据,以葡萄糖浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制葡萄糖标准曲线, 如图 1。图1 葡萄糖标准曲线由图 1可知,葡萄糖与吸光度呈良好的线性关系,其回归方程: y=- 式( 3) 相关系数:R2= 式中 x为葡萄糖浓度, y为吸光度。 不同单因素条件对木瓜多糖得率影响的研究本试验首先主要考察几种对水浸提法提取木瓜多糖得率影响比较大的因素[44] ,包括浸提温度、浸提时间、浸提时的液固比。从而找出这些因素影响木瓜多糖得率的大小和作用范围,为响应面实验的设计提供依据。 浸提时间对多糖提取率的影响 5 以1g 木瓜粉末为基准,各加入 50ml 蒸馏水,在 80。C 下提取,,,,, , 对多糖提取率的影响,再用苯酚-硫酸法测定其多糖的含量,最后分析结果。见表 2与图 2: 表2 浸提时间与多糖吸光度提取率的关系浸提时间/h 4