文档介绍：. .
. v .
DNA的粗提取与鉴定
1．根本原理
2．操作过程
(1)操作流程
选取材料→破碎细胞，获取含DNA的滤液→去除滤液中的杂质→DNA的析出与鉴定。
(2)材料的选取：选用DNA含量相对较高的生物组织。
(3)破碎细胞
①动物细胞：易破碎，可通过吸水破裂。
②植物细胞：参加洗涤剂、食盐后研磨。
(4)除去杂质的方法
方法一：利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同，通过调节NaCl溶液的浓度除去溶于和不溶于NaCl溶液中的杂质。
方法二：利用DNA对酶的耐受性，直接在滤液中参加嫩肉粉，反响10～15 min，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质，而不会破坏DNA。
方法三：利用DNA对高温的耐受性，将滤液放在60～75 ℃的恒温水浴箱中保温10～15 min，使蛋白质变性沉淀而DNA分子还未变性。
(5)DNA的析出：向处理后的滤液中参加与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2～3 min，溶液中会出现白色丝状物，用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。
(6)DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯***会被染成蓝色。
易错警示 (1)本实验不能用哺乳动物成熟红细胞作实验材料，原因是哺乳动物成熟红细胞无细胞核。可选用鸡血细胞作材料。(2)实验中两次使用蒸馏水，第一次的目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA，第二次的目的是稀释NaCl溶液，使DNA从溶液中析出。
1．以下列图表示以鸡血为实验材料进展DNA的粗提取与鉴定的操作程序，请分析答复以下问题：
(1)步骤一中，向鸡血细胞液中参加____________并搅拌，可使鸡血细胞破裂。
(2)步骤二中，过滤后收集含有DNA的____________。
(3)步骤三、四的操作原理是________________________________________________
________________________________________________________________________；
步骤四中，通过向溶液中参加____________调节NaCl溶液的物质的量浓度至____________mol/L时，DNA将会析出，过滤去除溶液中的杂质。
(4)步骤七：向步骤六过滤后的____________中参加等体积的冷却的____________，静置2～3 min，溶液中会出现________色丝状物，这就是粗提取的DNA。
(5)步骤七：DNA遇____________试剂，沸水浴5 min，冷却后，溶液呈______色。
答案 (1)蒸馏水 (2)滤液 (3)DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质 蒸馏水 (4)滤液 酒精 白 (5)二苯*** 蓝
解析 破碎红细胞应用蒸馏水，使之吸水涨破。DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在2 mol/L的NaCl溶液中DNA溶解， mol/L的NaCl溶液中DNA析出。可通过参加蒸馏水将2 mol/ mol/L的NaCl溶液。DNA不溶于冷酒精，遇二苯***加热呈蓝色。
. .
. v .
1． DNA与蛋白质在NaCl溶液中溶解度比较
2 mol/L NaCl溶液
mol/L NaCl溶液
溶解规律
DNA
溶解
析出
蛋白质
局部发生盐析沉淀
溶解
NaCl溶液从2 mol/L降低过程中，溶解度逐渐增大
2． DNA粗提取与鉴定中不同试剂的用途及原理比较
试剂
浓度
用途
原理("△〞为实验的主要原理)
NaCl溶液
2 mol/L
溶解DNA
DNA在NaCl溶液中的溶解度随溶液浓度的变化而改变，溶解度在2 mol/L时最大、 mol/L时最小
△
mol/L
析出DNA
2 mol/L
鉴定时的溶剂
酒精
95%(体积分数)
除去杂质以提纯DNA
DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些物质可以溶于酒精
△
二苯***
鉴定剂
DNA遇二苯***(沸水浴)会变蓝