文档介绍：第四章第四章病毒的复制病毒的复制病毒的生命存在形式: 细胞外的具有感染性的颗粒形式—病毒体细胞内的具有繁殖性的基因形式—病毒基因组用于病毒复制研究的实验系统噬菌体——细菌培养系统;动物病毒——动物细胞培养系统植物病毒——植物原生质体培养系统胞膜:吸附、侵入、囊膜的获得、释放胞浆:生物合成、装配、包涵体形成胞核:生物合成、装配、囊膜的获得、包涵体形成传代细胞系的优缺点: 传代细胞系的优缺点: 优点: 优点: 1) 1) 可以无限地传代。可以无限地传代。 2) 2) 不少细胞系对病毒很敏感。不少细胞系对病毒很敏感。 3) 3) 可在悬浮培养条件下培养,适合病毒抗原的大量生产。可在悬浮培养条件下培养,适合病毒抗原的大量生产。 4) 4) 生长旺盛,繁殖快速,对营养条件不苛刻。生长旺盛,繁殖快速,对营养条件不苛刻。缺点: 缺点: 1 1 )对分离野毒不敏感)对分离野毒不敏感 2 2 )在传代过程中遭到支原体和病毒的污染)在传代过程中遭到支原体和病毒的污染常用传代细胞系的种类常用传代细胞系的种类 BHK-21 BHK-21 :仓鼠肾传代细胞系; :仓鼠肾传代细胞系; PK-15 PK-15 :猪肾传代细胞系; :猪肾传代细胞系; IBRS-2 IBRS-2 :猪肾传代细胞系; :猪肾传代细胞系; Hela Hela : : 人的子宫瘤细胞系; 人的子宫瘤细胞系; Vero Vero :非洲绿猴肾细胞系; :非洲绿猴肾细胞系; Marc-145 Marc-145 :来源于:来源于 Vero Vero 细胞系; 细胞系; TK-143 TK-143 : : 人的胸苷激酶阴性细胞系; 人的胸苷激酶阴性细胞系; CHO CHO :中国仓鼠卵巢细胞; :中国仓鼠卵巢细胞; Sf9 Sf9 、、 Hif5 Hif5 :昆虫细胞系:昆虫细胞系三、细胞的保存与复苏三、细胞的保存与复苏细胞的保存细胞培养物的常温短期保存 1. 实验室中细胞的短期保存将已长成单层的细胞换液后置室温或 20-22 ℃下避光保存,可达 15 天以上。将细胞培养温度由 37℃降至 32℃甚至 30℃,可隔 15-30 天传代一次。 2. 长途运送细胞培养物的保存取刚刚长成单层的细胞培养物, 弃去营养液, 加入维持液至满瓶( 勿使培养瓶内存留空气), 随后用橡皮塞紧塞瓶口,并作适当的包扎。运输途中的温度应保持在 15-25 ℃左右。到达目的地后,置 37℃培养 1 天,再行传代。细胞培养物的长期保存 1. 将刚长满单层的细胞,按细胞传代方法消化吹散后,装入离心管中。 -3000r/min 离心 5-10min 。 3. 用适量的含有 20% 犊牛血清、 10% 二甲亚砜( DMSO )的 DMEM 悬浮,分装于细胞冻存管中。 ℃ 2h, -20 ℃ 2h, -70 ℃过夜,然后置于液氮中长期保存。——或在液氮气相中过夜,然后置于液氮中长期保存。——或置于液氮气相中,按 5min 1cm 的速度逐渐往下降,直至液氮中长期保存。——将冻存管放入装有异丙醇的程序降温盒中,再置-80 ℃过夜晚,后放入液氮细胞的复苏 1 、将冻存于液氮中的细胞取出。 2 、迅速置于 42℃-50 ℃水浴中,并不停地摇动,使其快速解冻。 3、 2000-3000r/min 2-5min 离心去掉冻存液, 用生长液