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酵母菌的染色与观察
摘要：本实验通过用美蓝染色制成水浸片来观察酵母形态和出芽生殖方式，并区分酵母菌死活细胞。以生长在麦氏培养基上的酿酒酵母为材料，采用Schaeffer-Fulton氏染色word
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酵母菌的染色与观察
摘要：本实验通过用美蓝染色制成水浸片来观察酵母形态和出芽生殖方式，并区分酵母菌死活细胞。以生长在麦氏培养基上的酿酒酵母为材料，采用Schaeffer-Fulton氏染色法，进展子囊孢子的观察。
关键词：酵母菌水浸片法子囊孢子 出芽生殖
前言
酵母菌是单细胞的真核微生物，细胞核和细胞质有明且分化，个体比细菌大得多。酵母菌的形态通常有球状、卵圆状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。酵母菌的无性繁殖有芽殖、裂殖和产生孢子；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，而复原型为无色。用它对酵母菌染色时，由于活细胞的新陈代谢作用，使细胞内具有较强的复原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的复原型，所以酵母的活细胞无色；对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，如此因它们无此复原能力或复原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。
子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。在酵母菌中，能否形成子囊孢子与其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。麦氏 (McClary) 培养基 ( 葡萄糖－醋酸钠培养基 ) 有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。
1材料
酿酒酵母麦氏琼脂斜面培养物。
葡萄糖，KCl，酵母浸膏，醋酸钠，琼脂，蒸馏水，5%孔雀绿水溶液，%番红水溶液，95%乙醇，%美兰水溶液。
酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶〔内装香柏油和二甲苯〕，擦镜纸，接种环，烧杯，试管等。
2实验步骤
麦氏〔Meclary〕琼脂培养基的配方如下：
成分
葡萄糖
KCl
酵母浸膏
醋酸钠
琼脂
蒸馏水
含量
.
4g
200mL
113℃灭菌30min。
液体培养基的制备
、1g蛋白胨、2g葡萄糖参加100ml水配制成液体培养基。
无菌操作由酿酒酵母麦氏琼脂斜面培养物挑取菌种，在已冷凝好的斜面培养基上划线接种。
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在28℃条件下恒温培养7d。
美蓝染液水浸片法
在载玻片中央加一滴％吕氏碱性美蓝染液，无菌操作法取培养基中培养的酵母菌少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。用镊子夹盖玻片一块，小心盖在液滴上。
将制好的水浸片放置3min后镜检。先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。30min后再次观察。
子囊孢子观察
制片
在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴无菌水，用无菌操作方法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成薄膜。
枯燥固定
待涂片自然枯燥后，让菌膜朝上，通过火焰2～3次进展固定〔以不烫手为宜〕。
染色
加5%孔雀绿水溶液m