文档介绍：总糖和还原糖的测定——斐林氏法作者:未知来源: 生物秀时间: 2006-8-30 总糖和还原糖测定方法较多,如 3,5—二硝基水杨酸法、碱性铜试剂法、蒽***比色法、斐林氏法等。这里只介绍斐林氏法。一、目的学****掌握生产实践中常用的快速定糖方法。二、原理还原糖在碱性溶液中能将 Ag +, Hg +, Cu 2+, Fe ( CN ) 3-等金属离子还原,而糖本身则氧化成各种羟酸,利用这一特性可以对还原糖进行定量测定。本实验采用斐林试剂热滴定法,氧化剂是斐林试剂,它是由甲乙两种溶液组成,甲液中含有硫酸铜、次***蓝;乙液中含有氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁***化钾(黄血盐)。当甲乙两液混合时,硫酸铜和氢氧化钠作用形成氢氧化铜沉淀, 由于溶液中存在酒石酸钾钠,它和氢氧化铜形成了可溶性络合物。酒石酸络铜(Ⅱ)钾钠盐在与还原糖共热时,二价铜离子即被还原成一价的氧化亚铜红色沉淀。此氧化亚铜与试剂中亚铁***化钾反应生成可溶性的亚铁***酸络铜( Ⅰ)钾盐。 Cu 2O+K 4 ) 6+3H 2O→K 2 Cu 2 ) 6+2 KOH +2H 2O 亚铁***化钾亚铁***酸络铜( Ⅰ)钾盐斐林试剂中二价铜的还原力比次***蓝强,因此所滴入的标准葡萄糖溶液首先使二价铜还原,只有当二价铜被还原完毕后,才能使次***蓝(甲烯蓝)还原为无色,测定中以此作为滴定终点。在测定时先做一对照管(不加样品),用标准葡萄糖滴定求知一定体积斐林试剂中二价铜和次***蓝的量,即测定对照管消耗的标准葡萄糖量( A)。再做样品管,样品中还原糖消耗斐林试剂中一部分二价铜,剩余的量再用标准葡萄糖来滴定,即样品消耗的标准葡萄糖量(B)。将(A)减去(B)就可求得样品中还原糖量。三、器材及试剂: : ①山芋粉②广范试纸 pH1 ~ 12 。③吸管 5毫升( ×4), 10 毫升( ×2)④容量瓶 100 毫升( ×3) ⑤烧杯 150 毫升( ×1), 100 毫升( ×1)⑥三角烧瓶 250 毫升( ×6) ⑦滴定管 25 毫升( ×1)⑧双孔橡皮塞⑨电炉 300W ( ×1)⑩天平。 ①斐林氏甲液: 15 克硫酸铜、 克次***蓝溶于 1升蒸馏水中。②斐林氏乙液: 50 克酒石酸钾钠、 54 克氢氧化钠、 4克亚铁***化钾溶于 1升蒸馏水中。③ % 标准葡萄糖溶液:准确称取干燥恒重的葡萄糖 克, 加入少量蒸馏水溶解后,再加 8毫升浓盐酸(防止微生物生长), 蒸馏水定容至 1升。④ 6mol · L-1 盐酸; ⑤ 6 mol · L-1 氢氧化钠。四、操作步骤