文档介绍：B群链球菌核酸检测试剂注册技术
审查指导原则
本指导原则旨在指导注册申请人对B群链球菌核酸检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。
本指导原则是针对B群链球菌核酸检测试剂的一般要求，，对纯度、浓度、保存稳定性等详细验证资料。
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应详述引物和探针的设计原则，提供引物、探针核酸序列、模板核酸序列及两者的对应情况。建议设计两套或多套引物、探针以供筛选，针对所有预期适用型别进行检出能力和特异性（如交叉反应）的评价，选择最佳组合，并提交筛选的研究数据。
如为外购，引物和探针应提供合成机构出具的质检证明，如纯度（应达到电泳级或HPLC级）、序列准确性等，申请人
应对引物和探针核酸序列准确性、纯度、浓度、探针标记的荧光素或化学发光物等进行核实，同时申请人应进行功能性验证，并提供相关资料。
PCR反应所需酶
DNA聚合酶，应具有DNA聚合酶活性，无核酸内切酶活性，具热稳定性，如：94℃保温1小时后仍保持50%活性；尿嘧啶糖基化酶（UNG），具有尿嘧啶糖基化活性，无核酸外切酶及核酸内切酶活性，应对酶活性有合理验证；应提供有关保存稳定性、活性及功能性实验等验证资料。

申请人应提供企业参考品的详细制备过程，包括组成、来源、菌株特性（如名称、型别、靶核酸的拷贝数/细菌浓度等）信息。企业参考品的项目应包括：阴性参考品、阳性参考品、最低检测限参考品、精密度参考品等。阳性参考品、最低检出限参考品应能覆盖临床常见型别，至少包括Ia、Ib、III、V等。阳性参考品、最低检测限参考品、精密度参考品等建议采用灭活的菌株。阴性参考品应至少包含分析性能研究资料中交叉反应必须验证的微生物。
（三）主要生产工艺及反应体系的研究资料
，可以图表方式表示，并说明主要生产工艺的确定依据。
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、样本处理方式的选择（如对样本采集拭子和保存液的验证，样本类型为增菌后的人体样本，需验
证配套的增菌培养基），提供相关的研究资料。
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，包括酶浓度、引物/探针浓度、dNTP浓度、阳离子浓度、样本量及反应体积等以及PCR各阶段温度、时间及循环数的研究资料。
，如果有差异应分别详述。
（四）分析性能研究资料
申请人应提交生产者在产品研制或成品验证阶段对试剂盒进行的所有性能验证的研究资料，对于每项分析性能的评价都应包括具体研究目的、实验设计、研究方法、可接受标准、实验数据、统计方法等详细资料。有关分析性能验证的背景信息也应在申报资料中有所体现，包括实验地点（实验室）、适用仪器、试剂规格、批号、临床样本来源等。分析性能评价的实验方法可以参考相关的美国临床实验室标准化协会批准指南（CLSI-EP）文件或国内有关体外诊断产品性能评估的指导原则进行，建议着重对以下分析性能进行研究。
DNA提取
细菌DNA提取主要有以下目的：富集目的基因浓度、保证目的基因序列的完整性、增加PCR模板溶液均一性、去除PCR抑制物，是决定PCR成败的关键环节。因此，无论申报产品是否含有DNA分离/纯化的组分，企业都应对核酸提取的环节做详细的验证。临床标本中可能含有各式各样的
PCR抑制物，因此，对于DNA提取试剂的选择，除最大量分离出目的DNA外，还应有纯化步骤，尽可能去除PCR抑制物。目前常见的DNA分离纯化方法和改良方法各有优势和不足，申请人应结合申报产品的特性，合理选择DNA分离/纯化试剂，并提供详细的验证资料。

建议使用GBS菌株的梯度稀释液来确定最低检测限。每个梯度进行不少于20次的重复检测，将具有95%阳性检出率的最低菌株浓度作为最低检测限。应明确每份菌株的来源、浓度、制备方法等信息。

建议使用最低检测限水平的菌株浓度，对不同来源的GBS菌株或真实临床样本进行至少20次的重复验证，阳性检出率不低于95%。注册申请人应能够提供用于最低检测限验证的各个菌株或临床样本的来源、制备方法及浓度等信息。最低检测限建议采用菌落形成单位（CFU）和靶核酸的拷贝数两种方法分别进行研究。
最低检测限的确定和验证需要覆盖临床常见型别，至少包括Ia、Ib、III、V等。
（包容性）
建议使用具有时间和区域特征性的不同来源的临床样本进行验证，至少包括GBS临床常见型别，如Ia、Ib、III、V等。建议在略高于最低检测限浓度进行研究，并提供样本的来源、浓度、菌株型别的确认方法等信息。

注册申请人应对精