文档介绍：试验 细菌的染色
细菌的单染色法
细菌的革兰氏染色
芽孢染色
荚膜的染色
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1，学****微生物涂片，染色的基本技术，把握细菌的简洁染色法；
2，初步熟识细菌的外形特点；
3，学****细菌的革兰氏染色原理和方法 4 ，明白细菌tinued）
2，干燥 室温自然干燥
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4，染色
◇ 将玻片平放于玻片搁架上，滴加染液于涂片上（染液刚好掩盖涂片薄膜为宜）；
◇ 美蓝染色1-2min；石碳酸复红染色约1min；
操作步骤（continued）
5，水洗
倒去染液，用洗瓶（内装自来水）轻轻冲洗，直至涂片上流下来的水无色为止；染色废液收集在废液缸中；
Note: 水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下，水流不宜过急，以免涂片薄膜脱落；
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7，镜检
细菌个体微小，一般使用油镜观看细菌个体外形；
操作步骤（continued）
6，干燥
自然干燥或用电吹风吹干，也可用吸水纸吸干；
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7，镜检（continued）
Notes:
必需等涂片完全干后才可滴加香柏油
油镜使用完毕，切记按规定步骤擦洁净，否就可能损害镜头
3）擦油镜镜头方法：分三步 A）先用擦镜纸揩去镜头上的香柏油 B）从双层瓶的下层沾少许二甲苯滴在另一片擦镜纸上 ，擦拭镜头； C）再用一小片擦镜纸擦去镜头上可能残留的二甲苯；
操作步骤（continued）
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2，革兰氏染色
单染色法：只能观看微生物的大小，外形，和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等；
复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有帮助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法；常用的有： 革兰氏染色法，抗酸染色法，芽孢染色法，荚膜染色法等；
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革兰氏染色（Gram stain）
1984年，丹麦医生Gram接受革兰氏染色法细菌细胞壁区分为两种类型：革兰氏阴性（G+）和革兰氏阳性（G-）
革兰氏染色步骤:
1）结晶紫初染；2）碘液媒染；
3）酒精脱色； 4）番红复染
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G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性屏障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上；呈紫色；
Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红复染后呈红色；
试验原理
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细菌的特殊外形结构
芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各种极端环境；
荚膜：多糖，包裹在菌体外围，爱护菌体
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试验材料
大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌（2d），胶质芽胞杆菌
革兰氏染色液一套
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试验步骤
革兰氏染色
枯草杆菌的芽孢染色
荚膜的染色
绘图，写试验报告
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革兰氏染色的步骤
1. 涂片
2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色；
3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其掩盖涂面1分钟，后水洗；
4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约15－20秒，后立刻用流水冲洗；
5. 复染：滴加番红染色液，染3分钟，水洗后用吸水纸吸干；
6. 镜检：观看染色结果并绘图；
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Figure 1 - A Gram stain of Gram + Staphylococcus cells.
Figure 2 - Gram stain of Gram –
E. coli cells
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3 枯草杆菌芽孢的染色
1，制备菌液：加2-4滴蒸馏水于小试管中，用接种环从斜面挑取菌体4环于试管中充分混匀；
2，加染色液： 离心管中；
3，加热：沸水浴，15-20分钟；
4，涂片：用接种环从离心管中取一环菌涂于一洁净载玻片上，制成涂片；
5，干燥，火焰固定
6，水洗：用水洗至流出的水中无绿色为止；
7，复染：加复红染色1-2分钟；水洗，吸水纸吸干；
８，镜检：10x ，40x ，100X（油镜）观看；
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4细菌荚膜的染色
荚膜
负染色法：
1，制片：取洁净的载玻片一块，加一滴黑墨水，取少量的菌体放入墨水滴中混匀并涂片；
2，刮片：另取一载玻片，以三十度角将其边缘浸入黑素中向右端拖动，将黑素涂成一薄层；
3，镜检：10x ，40x 物镜观看（留意物镜不要接触黑素，不要用油镜观看）
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本试验支配
简洁染色：枯草芽孢（1d）；
革兰氏染色：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，本人斜面菌株；
荚膜染色：胶质芽孢