文档介绍：浙大微生物大实验报告
浙大微生物大实验报告
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摘要：本实验以土壤中的微生物作为原材料，根据微生物各自的生长特点,配制不同成分的微生物培养基。将微生物培养物或含有微生物的样品在无菌条件下移植到培养基上培养,在分离出相０0mL
灭菌1。05kg／ｃｍ230min
制备方法配制（以配制2００mL)培养基为例：
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吸取配方液：１%ＫNO3２0ｍＬ；１％Ｋ2 HPO410ｍL；１%MgSO4·7Ｈ２ Ｏ１0mL;l％NａCl1０ｍL；1%ＦｅSＯ4 7Ｈ２Ｏ0。0２mL。加水补足至 20０mL，置电炉上加热。用另一只搪瓷杯称取可溶性淀粉4g，从200mL中取出少量加入淀粉中，用玻棒调成糊状，待液体沸腾后将淀粉糊洗入培养液中,搅匀,调ｐH至 ，加琼脂 ４g，加热至琼脂完全溶化为止，趁热分装试管，以下一系例步骤同于配制细菌培养基的操作方法。
3. 无菌水的制备
无菌水,为下一次微生物分离实验中所需用而准备。
１00mL三角瓶（装有玻璃珠)，装自来水４５mＬ，试管中装9mL自来水,塞上棉塞,,并经干热灭菌。
（二）分离培养微生物常用器皿的准备
1. 清洗一些玻璃仪器:如三角瓶试管，培养皿、吸管等.
2． 棉塞的制作:装培养基和分离培养需用的部分玻璃器皿，需加棉花塞梯塞的作用为过滤空气,使试管内外空气可以流通,但外界空气中杂菌不能进入，避免污染、试管、三角瓶都要做棉塞。吸管上部也要塞入棉花，在管口约1—2mm处,用解剖针塞入少许棉花，（约１—１．5ｃm 长）以防止细菌吸入口中，井避免将口中细菌吹入管内。.
3。 包装培养皿和吸管等。为了使培养皿、吸管、三角玻棒等洗净，干热灭菌后，不让表面暴露,以保证无菌状态，为此干热灭菌前先用旧报纸包装妥当（见示范），每组同学包培养皿6只(一包）。
吸管的包装，将塞好棉花的吸管尖端,放在4~5cｍ宽的长纸条的一端，约成45°角左右，折叠纸条,包住吸管尖部，用左手握住移液管身，右手将移液管压紧,在桌面上向前搓转,，折叠打结，准备灭菌。
(三）微生物的分离
1. 用稀释平板法（又名混菌法）从土壤中分离真菌。
（1）制备土壤稀释液
无菌操作过程见教师示范.
A. 取土壤５g,放入装有４５ｍL无菌水的三角瓶中，振荡1０mｉn，即为稀释10－１的土壤悬液。
B。 另取装有9mL无菌水试管５支,用记号笔编上１0-2、10－3、10－４、10—5、10—6。取已稀释成10-１土壤液，振荡后静止 ０．５min,用无菌吸管吸取 1mL土壤悬液加入 １0'的无菌水的试管中，并在试管内轻轻反复吹吸数次，使之充分混匀，即成10—2土壤稀释液。同法由10－2的试管中吸取1mL稀释液加入编号为１０—３的无菌水试管中,混匀后即为10－3土壤稀释液，依次连续稀释至1０-4、1０-5 、１０－６土壤稀释液。
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在土壤稀释过程中，以用一支吸管由浓到稀,稀释到底，稀释方法见图７-1。
图7－1 检样的稀释方法
(2）每组取无菌培养皿2付，即每个同学做一只。学号单号学生用1０—5稀释度液,双号学生用１０—4稀释度液.
①先在无菌培养皿底部贴上标签,注明分离菌名、稀释度、组别、班级。
②取另一吸管,以无菌操作法吸取10—4或1０—5土壤稀释液1mＬ,加在无菌培养皿的一边，在皿的另一边加入 2滴 5 ０0０U/mL的链霉素液。此时严防两液相混.
③取已融化在水浴锅中保温50oC左右的马铃薯蔗糖琼脂培养基2 管(10ｍL装，一管倒一皿),以不烫手为准，倒入上述培养皿中(见图７—2），轻轻转动培养皿,使菌液、链霉素液、培养基充分混匀铺平皿底，放在平坦的桌面上,凝固后,翻转培养血,置2８～３０ｏC恒温培养养５～。并计算出每1g土壤中真菌的数量。即用某一培养皿内真菌的菌落数乘以该培养皿接种液的稀释倍数即得.
(3）挑取单个菌落接种到外面培养基上作纯化和性能测定,若不纯，需要继续分离.
2． 用平板涂抹法分离土壤中的放线菌（土壤稀释液制备同上）。
①每组取无菌培养皿2付（每个同学各做一只).各在培养皿底部贴上标签，注明分离菌名、稀释度、组别、班级。
②以无菌操作法先在培养皿中加入0。5％重铅酸钾溶液２滴,取已融化的淀粉琼脂培养基２管,分别倒入２付培养皿中，轻轻转动培养皿，使培养基与重铅酸钾充分混匀，铺平,制成平板。
③待平板凝固后，另取一支吸管吸取１０-3(单学号学生）或10-4(双学