文档介绍：细胞器分离
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将动植物组织制成匀浆，在适当的悬浮介质中用差速离心法可以分离细胞线粒体。在一定的离心场中(选用离心机的一定转速)，球心颗粒的沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的黏度。在一均匀悬浮介质中线粒体) 上清液(弃去)
洗涤
mol／L蔗糖溶液10 mL，10000×g离心10 min
沉淀(纯化的线粒体) 上清液(弃去)
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3．活性鉴定：
(1) 细胞核：取核沉淀1滴涂于载玻片，加入Carnoy固定液15 min，晾干。Giemsa染液染10 min，蒸馏水漂洗数秒，用滤纸吸干水、用显微镜(40×)检查，细胞核呈紫红色，混杂的胞质为浅蓝色碎片。
(2) 线粒体： 取线粒体沉淀滴在载玻片上，勿太密。滴加1％詹钠斯绿溶液染液，10 min后用光学显微镜观察，线粒体蓝绿色，呈小棒状或哑铃状。
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玉米线粒体的分离
从植物细胞分离线粒体，除了作线粒体功能测定外，在植物细胞遗传工程中，常用于分离核外基因—线粒体DNA等目的。
分离线粒体的方法仍采用均匀介质中的差速离心。/L甘露醇代替。EDTA整合二价阳离子，Ca2＋除去后细胞间粘着解体，促使组织分散成单个细胞。牛血清白蛋白(BSA)能包在细胞外面，并作为竞争性底物削弱蛋白酶的作用。
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【材料】
玉米黄化幼苗(水稻、高粱等幼苗均可)。
【实验用品】
1．试剂：
（1）分离介质：，50mmol/L的Tris-盐酸缓冲液()，3mmol/LEDTA，(BSA)。
50mmol/L的Tris-Hcl缓冲液()配法：***氨基甲烷(Tris)溶液与42mL ，加水稀释至100mL。
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（2）保存液：()
（3）20％次***酸钠(NaClO)溶液。
（4）1％詹纳斯绿B染液，用生理盐水配制。
2．器材：温箱、冰箱、纱布、瓷研钵、冷冻控温高速离心机。
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【实验步骤】
1．玉米种子用20％次***酸钠溶液浸泡10min消毒，清水冲洗30min，再浸泡清水15h。将种子平铺在放有湿纱布的盘内，保持湿度，置温箱28℃于暗处培育2~3d。待芽长到1~2cm长时剪下约15g，放0~4℃1h。
2．加3倍体积分离介质，在瓷研钵内快速研磨成匀浆。
3．用多层纱布过滤，滤液经700×g离心10min。除去核和杂质沉淀。
4．取上清液10000×g离心10min，沉淀为线粒体。再同上离心洗涤一次。
5．沉淀为线粒体，。注意以上匀浆化及离心均控制在0~4℃进行。
6．线粒体的观察：取线粒体沉淀涂在清洁的载玻片上，不待干立即滴加1％詹纳斯绿B染色20min，放上盖玻片，用显微镜观察，线粒体是蓝绿色圆形颗粒。
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【注意事项】
实验全过程要求在0℃~4℃进行，如果使用非冷冻控温的离心机，一般只宜分离细胞核和线粒体，同时注意使样品保持冷冻；尽可能充分破碎组织、缩短匀浆时间。整个分离过程不宜过长。
【实验报告】
绘制线粒体示意图。
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II 叶绿体的分离与荧光观察
【目的】
了解叶绿体分离的一般原理和方法，并熟悉应用荧光显微镜方法观察叶绿体荧光现象。
【原理】
叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，能发生特有的能量转换。利用低速离心机可以分离叶绿体，其分离在等渗溶液(0．35 mol／L***化钠或0．4 mol／L蔗糖溶液)中进行，目的是为了防止渗透压的改变引起叶绿体的损伤。将匀浆液在1000 r／min离心，去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞，然后，3000 r／min离心，可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。在室温下进行分离要迅速。
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某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。若停止供能荧光现象立即停止。有些生物体内的物质受激发光照射后，可直接发出荧光(称为自发荧光)，如叶绿素的火红色荧光。有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光(称为间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。本实验利用荧光显微镜对发荧光的叶绿体进行观察。
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