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农业微生物实验课指导
（修订版）
草地农业科技学院
草地保护研究所编写
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5g)、NaCl()、
FeSO4·7H2O()、琼脂20g、。
2、步骤：
配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入少于所需水量的沸水中，在火上加热，边
搅拌边依次逐一溶化其他成分，溶化后，补足水分到 100mL，调pH，121℃灭菌20min。
高温灭菌后，倒平皿前加入 10%酚2滴至100mL培养皿中混匀，将培养基倒入平皿内约
15mL/皿。鈣罷锱铆懼壯袭灑時历贐轍還惻额。
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实验二环境中微生物的分离和培养
一、实验目的
1、消毒和灭菌的操作方法及原理。
2、证明实验室环境与体表存在微生物。
3、学****空气、土壤、实验室中微生物分离的方法。
4、观察不同类群微生物的菌落形态特征。
二、实验原理
微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必须从中进行分离。在保藏菌种时
不慎污染时也需予以分离。
分离纯化方法很多，基本原理相似，即将待分离样品进行适当的稀释，使微生物的细胞(或
孢子)尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。
土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此，
土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离纯化得到许多
有价值的菌株。
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三、实验准备
实验材料：PDA培养基(上一次实验课已准备)
实验器材：天平、酒精灯、培养皿、三角瓶、试管、移液管、培养箱、记号笔、无菌水、超净工作台、棉花、酒精、拨针、接种环、手术刀和镊子等。
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四、实验步骤
(一)消毒和灭菌
(1)无菌滤纸的干热灭菌(暂时不做该部分)
在160℃下，烘2小时。
开始灭菌时升温不宜过猛，物品不要太挤，温度上升至 160℃时开始计时，2小时后切断
电源，温度降至 60℃左右后，取出灭菌物品。
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(2)接种针、镊子等的高温火焰灭菌
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在95%酒精中浸过后，通过火焰将酒精烧去，重复三次以上。
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(3)紫外线用于空气消毒
波长在250-280nm的紫外线杀菌力最强，30瓦紫外光灯直射2m内照射半小时，即可杀死空气中的微生物。打开紫外灯，灭菌30min。
(4)化学药品用于种子及植物表面消毒
次***酸钠消毒：种子用 1%，%消毒各1min。再用无菌水漂洗 3-5次。
(二)环境中微生物的检测
器材PDA培养基(上一次实验课已备)，无菌镊子，无菌棉球等
实验步骤：
取5个倒好培养基的培养皿作为对照;
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(2)
取3个PDA培养基，打开皿盖，使培养基暴露在空气中约10
min，再盖上皿盖，写明处
理、组别和日期；
(3)
取3个PDA培养基，用无菌镊子夹上无菌棉球在实验台或凳子上擦以下，然后打开皿盖用
棉球在培养基表面轻轻涂抹(勿划破培养基)，写明处理、组别和日期再盖上皿盖；
(4)
取3个PDA培养基，打开皿盖用你的手指在培养基表面接触轻压
3-5点，再盖上皿盖。写
明处理、组别和日期；
(5)
取取3个PDA培养基，打开皿盖，对着培养基表面咳嗽或打喷嚏
2-3次(或者深呼吸)，再
盖上皿盖。写明处理、组别和日期；
(6)
上述工作完备后，将各皿倒置保存在28℃下，培养3-6天。3天后进行初次
统计，7天后，进行再次统计。
五、思考题
反复练****消毒和灭菌，并搞清楚其本质的区别。
统计结果并做表，完成以下表格的内容
环境/人体菌落数(个/皿) 菌落特征(形状、颜色、大小、
隆起度、边缘等)坠詭鲟顿紱鲚濘现層铼缵螻栏窑殯。
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实验三病原微生物的分离和培养
一、实验目的
1、熟练掌握无菌操作技术和消毒、灭菌的操作步骤及其原理
2、掌握植物病原真菌的分离、培养和接种的一般方法，并掌握其基本原理
二、实验原理
自然界中各种微生物混杂生活在一起，要研究某种微生物的特性，首先须使该微生物处于纯培养状态。从混杂的微生物群体中获得只含有某一株微生物的过程称，即为微生物的分离与纯化。植物病原微生物的分离培养对病原物鉴定、病原物形态观察、植物病害接种体的培养等方面都是经常使用的研究手段。
植物患病组织内的微生物，如果给予适宜的环境条件，除个