文档介绍：实 验
培养基的制备和灭菌
主讲：廖鹏飞
E-mail: lfp_******@
南昌大学生物基础实验中心
一、目的要求
了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。
了解几种灭菌方法，重点掌握高压蒸汽灭 培养基分装好后，塞上棉塞，外面再包一牛皮纸，便可灭菌。灭菌的时间和温度按各培养基规定进行，以保证灭菌效果和不损坏培养基的必要成分。培养基经灭菌后，可放在37恒温箱培养24小时，无菌者方可使用。
在实验室里用得最多的加热灭菌法是高压蒸汽灭菌和干热灭菌。一般培养基和灭菌水等用高压蒸汽灭菌，而玻璃器皿常用干热灭菌。蒸汽灭菌为105-121℃，15-20分钟，干热灭菌为160-170℃，1-2小时。目的都是使细菌体内蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。      在同一温度下，湿热杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固，同时湿热穿透力强，而且当蒸汽与被灭菌物体接触凝成水分时，又可放出热量，使温度迅速增高，从而增加灭菌效力。
四、实验内容
四、实验内容
高压蒸汽灭菌法其步骤如下：
1. 灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。 2. 接通电源，进行加热 3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；或关闭排气阀，，待压力回复到0时再关闭排气阀。 4. ，此时灭菌器内的温度为121℃，维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。 5. 灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品
五、实验报告
思考题：
培养基应具备哪些条件?
在培养基配制操作过程中应注意什么问题?为什么?
培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养
基是无菌的?
高压蒸汽灭菌前为什么要将灭菌锅内的冷空气排尽?
玻璃器皿为什么在灭菌前要先行干燥?
加热蒸汽灭菌为什么比干热灭菌所要求的温度低、时间短？
实 验 大分子物质的水解实验 及糖发酵实验
一、实验目的
1. 证明不同的微生物对各种有机大分子的水解能力的不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2. 掌握进行微生物大分子水解实验的原理和方法
3. 了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用
4. 掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法
二、实验原理
微生物代谢与其他生物代谢有着许多相似之处，也有不同之处。微生物代谢重要特征之一，就是代谢类型的多样性，因此使得微生物在自然界的物质循环中起着重要的作用，同时也为人类开发利用微生物资源提供更多的机会与途径。人们在微生物的分类鉴定工作中，常利用其生理生化反应作用作为重要依据。
本实验分别安排微生物对生物大分子的分解利用（淀粉水解实验水解试验、明胶液化试验），对含碳化合物的分解利用（糖发酵试验）让同学们对微生物的代谢类型多样性有一个初步和感性的了解，同时学****利用微生物形态、结构以及生化反应的特征对某些细菌进行初步的分类。
本实验学****平板接种法、穿刺接种法、液体接种法。
三、实验材料
1．培养基：
淀粉水解培养基：2皿
明胶液化培养基：2支
葡萄糖发酵培养基：3支
乳糖发酵培养基：3支
2. 接种用具：接种环（针、钩），酒精灯，镊子，消毒棉球，打火机，标签贴纸，废物杯，纸巾，油性笔。
3. 实验菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、普通变形杆菌
四、实验内容
试验名称
培养基名称
接种菌名称
接种方式
每组个数
淀粉水解
淀粉培养基
枯草芽孢杆菌/大肠杆菌
平板
2
明胶水解
明胶培养基
枯草芽孢杆菌/大肠杆菌
穿刺
2
葡萄糖发酵
葡萄糖发酵培养基
大肠杆菌和变形杆菌
液体
3
乳糖发酵
乳糖发酵培养基
大肠杆菌和变形杆菌
液体
3
四、实验内容
（1）将固体淀粉培养基溶化后冷却至50℃，无菌操作制成平板
（2）用记号笔在平皿背面划成两部分。
（3）将枯草芽孢杆菌，大肠杆菌分别在不同的部分划线接种，并在平板的反面分别记下两部分的菌名。
（3）将接完种的平板倒置于37℃恒温培养箱，培养24h。
（4）观察结果时，可打开皿盖，滴加少量的碘液于平板上，轻轻
旋转，是碘液均匀铺满整个平板。如菌苔周围出现无色透明
圈，则说明淀粉已被水解，为阳性。透明圈的大小，说明该
菌水解淀粉能力的强弱，即产生胞外酶活力的高低。（以
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