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说明：蛋白质合成抑制剂。抑制细菌、藻类原生物和哺乳动物细胞生长。
嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑链霉菌(Streptomycesalboniger)发酵代谢
产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制精选文档
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说明：蛋白质合成抑制剂。抑制细菌、藻类原生物和哺乳动物细胞生长。
嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑链霉菌(Streptomycesalboniger)发酵代谢
产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种
动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是
氨酰-tRNA分子3'末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的
肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质
合成的提前终止并释放出C-末端含有喋吟霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素产生菌Streptomycesalboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-
乙酰转移酶(PAC,赋予机体对喋吟霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于
筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。
嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化
的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛
选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。
溶解性：溶于水，参考浓度50mg/ml。
使用方法
建议使用浓度
哺乳动物细胞：1-10Ng/mL最佳浓度需要杀灭曲线来确定；
大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为
125仙g/mLo注：使用喋吟霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且
受宿主细胞本身的影响。
溶解方法
用蒸储水溶解喋吟霉素配制成50mg/ml的母液，
分装于-20℃冻存；也可溶于甲醇，配制成10mg/ml的储存液。
喋吟霉素杀灭曲线的确定(以shRNA专染或者慢病毒转导为例)
嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞
所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNAffl胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立
适合自身实验体系的杀死曲线(killcurve)。
Day1：24孔板内以5~8x104cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔
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以进行后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜；
Day2：a）准备筛选培养基：含不同浓度喋吟霉素的新鲜培养基（如0-15Ng/mL,至少5个梯度）；b）往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选
培养基；之后37℃孵育细胞；
Day4：更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率。
根据细胞的生长状态，约2-3天更换新鲜的筛选培养基；
每日监测细胞，观察存活细胞率，从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效