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医疗器械无菌检查.pptx

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医疗器械无菌检查.pptx

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医疗器械无菌检查.pptx

文档介绍

文档介绍:医疗器械无菌检查
2
主要内容
无菌定义及无菌检查定义
无菌检验依据
试验主要设备
实验环境条件及人员要求
培养基种类及配制要求
培养基适用性检查
试验菌种及菌液制备
无菌检查方法验证
供试品无菌检查及结果判断
3
无菌MCC(B)64941]
白色念珠菌[CMCC(F)98001]
黑曲霉[CMCC(F)98003]
菌种的要求: 不得超过5代。采用适宜的方法保存;并以保证试验菌株的生物学特性。
26
(6)培养基适用性检查
菌液制备
一般当日使用。
取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌,少许接种至营养肉汤基中,生孢梭菌的新鲜培养物少许接种至硫乙醇酸盐流体培养基中,30~35℃培养18 ~24h;
白色念珠菌的新鲜培养物接种改良马丁培养基中, 23~28℃培养24 ~48h,%无菌***化钠溶液制成含菌量小于100cfu/ml菌悬液;
黑曲霉 菌斜面的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上, 23~28℃培养5 ~ 7天,使大量的孢子成熟。加入3~ %(ml/ml)%无菌***化钠溶液,将孢子洗脱。然后用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中,%(ml/ml)%无菌***化钠溶液制成小于100cfu/ml 的孢子悬液。(见表)
27
(6)培养基适用性检查
《中国药典》2010年无菌检查验证试验中使用7株菌见下表
菌 种
接种培养基
培养温度℃
培养时间
金黄色葡萄球菌
营养肉汤或者普通斜面
30~35
18~24h
铜绿假单孢菌
枯草芽孢杆菌
大肠埃希菌 (无)
生孢梭菌
硫乙醇酸盐培养基
白色念珠菌
改良马丁或者普通斜面
23~28
24~48h
黑曲霉
改良马丁斜面
23~28
5~7d
28
(6)培养基适用性检查
培养基接种
           金黄色葡萄球菌2支
铜绿假单胞菌2支
硫乙醇酸盐流体培养基 枯草芽孢杆菌2支
生孢梭菌2支
9支培养基装量12ml,空白对照1支。
分别接种小于100cfu/ml金葡、铜绿、枯草、生孢各2管,另1支不接种做空白对照,培养3天,逐日观察结果。
29
(5)培养基适用性检查
培养基接种
   
白色念株菌2支 
  改良马丁培养
黑曲霉2支                         
         
(5支培养基装量9ml,其中1支做空白对照)

分别接种小于100cfu/ml白色、黑曲各两支,另1支不接种做空白对照。培养5天,逐日观察结果。
30
(6)培养基适用性检查
结果判断
空白对照管应无菌生长,若加菌的培养管均生长良好,判该培养基的灵敏度检查符合规定。
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(7)试验(验证)菌种及菌液制备
菌种:试验用菌株及菌液制备:
金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003
大肠埃希菌[CMCC(B)44102]
枯草杆菌[CMCC(B)63501]
生孢梭菌[CMCC(B)64941]
白色念珠菌[CMCC(F)98001]
黑曲霉[CMCC(F)98003]
32
(6)试验菌种及菌液制备
10倍梯度稀释
选择适宜的3个稀释级别
要求<100cfu/ml
33
(7)无菌检查方法验证
验证准备条件:
稀释液、冲洗液及其制备方法
%蛋白胨水溶液
***化钠—蛋白胨缓冲液
制备的菌液,应当日使用。
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(7)无菌检查方法验证
目的:
证明所采用的方法适合于该供试品的无菌检查
确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不计。
确保在实际检验条件下,该供试品的无菌检查法的准确性、有效性和重现性。 验证时,按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。
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(7)无菌检查方法验证
菌种及菌液制备 :除大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B) 4 4102〕外,金黄色葡萄球菌 、 枯草芽孢杆菌  、 生孢梭菌、 白色念珠菌、黑曲霉同培养基灵敏度检查。大肠埃希菌的菌液制备同金黄色葡萄球菌。

方法验证试验与灵敏度检验所有菌种区别:大肠埃希菌代替铜绿假单胞菌。
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(7)无菌检查方法验证
菌液制备:
金黄色葡萄球菌(大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌) 接