文档介绍：微生物学实验报告
（格式标准）
( 生命科学专业 )
教师：黎 勇
点、自行处理实验材料、失败与思考等均可进行讨论（如涂片时蒸馏水不宜过多、取用菌时防止菌被灼烫变形、取菌宜少不宜多等均是可以讨论的内容） 。
实验二 细菌的革氏染色与芽孢染色
〔目的要求〕 观察细菌菌落的特征； 掌握简单染色法、 革兰氏染色法的原理及操作步骤；在油镜下观察细菌个体形态；学****环境中微生物的检查方法，并加深对微生物分布广泛性的认识
〔器材用具〕 \\. 的斜面培养物（ 18－24 小时）以及菌落平板各一个；染液：草酸铵结晶紫、划兰氏染液、卢戈氏碘、 95%的乙醇、蕃红；无菌水、显微镜、载片、滤纸、液体石蜡是、、擦镜纸、接种环。
〔方法内容〕：
（一）实验室环境中微生物的检查
（二）革兰氏染色法 涂片固定 冷却 结晶紫染色 1min 水洗 碘媒染 1min
95%乙醇 30-60s 水洗 番红复染 2－ 3min 水洗 干燥 油镜镜检
（三）芽孢染色 涂片固定 孔雀绿加热染色（勿干） 5min 水洗 番红复
染 1min
水洗 镜检
〔结果分析〕实验结果被染成紫色者即为革兰氏阳性，被染成红色者为革兰氏阴性；菌体染成红色，芽孢被染成绿色。
菌名：大肠杆菌 菌名：金黄色葡萄
球菌
放大倍数：
100× 10（× 5）
放大倍数：
100×10
（× 5）
染色反应： 红色（阴性）
染色反应： 紫色（阳
性）
菌名：枯草芽孢杆菌
放大倍数： 100× 10（× 5）
染色反应：紫色（阳性）
图 1 视野观察下细菌的革兰氏染色反应
图 2 枯草芽孢杆菌芽孢形态图
〔实验讨论〕
严格掌握脱色程度，是成败的关键。若脱色时间过度，则阳性菌初时之紫色脱出，复染成红色，误成阴性，反之脱色时间不足，阴性菌在初染时的紫色未能脱出，复染时不能染成红色，误以为阳性菌；涂片不能厚；卢弋氏碘即用即配。
作业
1、 绘出所观察到到细菌的视野图，并说明染色反应。
2、 哪些因素会影响到革兰氏染色结果的正确其中是关键的一步是什么
菌龄及培养条件和染色技术是最主要的，关键是脱色。
3、 怎样对未知菌进行革兰氏染色，以证明你的结果的正确
与已知菌混合涂片比较。
实验三 常用培养基的配制
〔目的要求〕了解培养基的配制原理；了解培养基常规配制程序；了解培养基过程各环
节的要求和注意事项。了解半合成培养基的配制原理，学****掌握肉膏蛋白胨培养基、马铃薯
培养基的配制方法。
〔器材用具〕等配各种培养基的组成成分，琼脂、 1N NaoH溶液 1N HCl 天平或台秤高压
蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。药匙、称量纸、
pH 试纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸报纸等。
〔方法步骤〕
( 一 ) 玻璃器皿的洗涤和包装 以小组为单位清洗、 控水，按 9 个为一组， 分别用报纸包
好并放入烘箱中等待灭菌。
( 二 ) 液体及固体培养基的配制过程
原料称量 （按配方次序） 溶解
调节ｐ
H
过滤澄清
分装
塞棉塞和包札
灭菌
分别按教材配方配制牛肉膏蛋白胨、马铃薯液体及固体培养基。
( 三 ) 培养基的分装 用玻璃漏斗，橡皮管，小玻璃管及弹簧夹制作分装装置 选用
15× 150 平口试管或 150mL锥形瓶贴上标