al Time PCR.pdf

文档介绍：e To e To
实时荧光定量PCR介绍
(Real Time PCR)
宝生物工程(大连)有限公司
TaKaRa Biotechnology(Dalian)Co.,Ltd
主要内容
Real Time PCR 基础知识
Real Time PCR 实验方法
Real Time PCR 解析方法
Real Time PCR 应用实例
Real Time PCR 相关试剂与服务
Real Time PCR 基础知识
Real Time PCR 的用途及原理
Real Time PCR 检测方法
Real Time PCR 检测系统
Real Time PCR 用途
定性分析绝对定量相对定量
病毒和病原菌检测病毒和病原菌定量分析差异显示结果验证
生物品种鉴定导入基因拷贝数解析基因芯片结果验证
siRNA效果确认
SNP解析 GMO定量检测
mRNA表达量分析
操作简单,无需电泳,检测快速,降低污染几率,
适用于大量样品检测,检测灵敏度高;
可以在宽广范围内进行准确定量。
Real Time PCR 原理
Real Time PCR
使用Real Time PCR扩增装置实时监测PCR扩增产物并进行分析的方法。
发
射激
光发
光 Ct值
Real Time PCR 原理
同一个样品重复96次PCR的扩增曲线
Ct值
Real Time PCR 原理
阈值:在扩增曲线的指数增长区域内适当位置上
设定的荧光检出界限。
Ct值概念
Real Time PCR扩增过程中,每个反应管内的荧
光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。
( C-代表Cycle,t-代表threshold)
Real Time PCR 原理
在PCR反应体系中加入荧光物质,并实时监测荧光信号积累的整个PCR进程,最
后通过已知浓度的标准品制作的标准曲线对未知浓度的样品进行定量分析。