文档介绍：可编辑可修改
DNA 提取方法和步骤
2
幼叶，装入离心官中加液氮。（实际应用时，用
1-2g 经避光 24 小时 [ 去淀粉 ]
1. 取 1— 2cm
的嫩叶）
冷冻后，可编辑可修改
DNA 提取方法和步骤
2
幼叶，装入离心官中加液氮。（实际应用时，用
1-2g 经避光 24 小时 [ 去淀粉 ]
1. 取 1— 2cm
的嫩叶）
冷冻后，迅速研磨成粉末，在化冻前加入 600ul 预热到 650C的 DNA提取液。（研磨时用经打磨后的玻璃棒在离心管中捣碎）
于 650C， 20rpm 离心 1 小时。（人工摇匀即可）
冷却至室温，加 500ml ***仿 / 异戊醇（ 24：1）混匀（不可振荡，但可颠倒，混匀至溶液成乳浊状）
40C，10000rpm，离心 10min。
** 取上清液，加等体积***仿 / 异戊醇（ 24： 1）混匀（用宽口吸头取上清液至新离心管，不可过猛振荡，约混 30 min ）40C， 10000rpm，离心 10min。
取上清液，加等体积***仿 / 异戊醇（ 24：1）混匀（用宽口吸头取上清液至新离心管，不可过猛振荡，约混 30 min ） 40C， 10000rpm，离心 10min。
8. 加 2 倍上清液体积的 100%乙醇于新离心管中，缓缓加入上清液，可见 DNA出现。
9. 用一事先剪去尖端的灭菌吸头钩出 DNA。
用 1ml70%乙醇（ -20 0C）洗涤 DNA，钩出，干燥。
干燥后加 60ulTE （含 RNA酶 1ul 1mg/ml）溶解 DNA，消化（除去） RNA，室温保持 30min
加 180ulTE,240ul ***仿 / 异戊醇（ 24：1）混匀 .
40C，13500rpm，离心 5min。
14. 取上清液，加 1/10 体积 ,3mol/l 乙酸纳 (ph= ， 2 倍体积 95%乙醇（ -20 0C）， 30-40min 。
钩出 DNA75%乙醇洗涤，钩出
用 50ulTE 溶解。
DNA提取液
500ml
100ml
400ml
1mol/l Tris-Hcl (pH=
50ml
10ml
40ml
1
可编辑可修改
l EDTA (pH=
50ml
10ml
40ml
5mol/l Nacl
50ml
10ml
40ml
10% SDS( 或 20%SDS)
62ml/31ml
dd H 2O
269ml/238ml
亚硫酸氢纳（ NaHSO）

3
3mol/l NaAc(pH=
用 H 2O 加 dd H 2O溶解，用冰乙酸调至 PH=，加 dd H2O 定容至 100ml，分装后高压
灭菌 20min , 于 40C 保存。
TE