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维生素b12含量试剂盒说明书hplc法50管48样.doc

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维生素b12含量试剂盒说明书hplc法50管48样.doc

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文档介绍

文档介绍:维生素B12含量试剂盒说明书
HPLC法 50管/48样
测定意义:
维生素是人和动物为维持正常的生理功能而必须从食物中获得的一类微量有机物质,在人和动物生维生素B12含量试剂盒说明书
HPLC法 50管/48样
测定意义:
维生素是人和动物为维持正常的生理功能而必须从食物中获得的一类微量有机物质,在人和动物生长、代谢、发育过程中发挥着重要的作用。维生素大致可分为脂溶性和水溶性两大类,水溶性维生素主要包括维生素C和B族维生素。
维生素B12又叫***钴***(Cyanocobalamin),是一种重要的生物活性物质。可以用来治疗恶性贫血症,也是许多微生物和动物的生长因子,同时作为辅酶参与一系列化学反应。人体缺乏维生素 B12会增加心脏病、血管疾病、中风等的患病几率。
测定原理:
维生素B12在210 nm下有吸收峰,可以利用高效液相色谱法测定其含量。
需自备的实验用品:
高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、氮吹仪、涡旋振荡器、针头式过滤器(有机系,50个,)、滤膜(水系和有机系各1个,)、耐水C18柱( ×250 mm)、可调式移液器、样品瓶(50个,2mL)、内衬管(50个,放置在样品瓶内用于微量样品进样)、乙***(色谱级,100 mL)和超纯水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存(提取液);
试剂二:×1支,-20℃保存。
实验前的准备工作:
1、将超纯水1000 mL和乙***100 μm的滤膜抽滤,以除去溶剂中的杂质,防止堵塞色谱柱。(注:蒸馏水用水系滤膜抽滤,甲醇用有机系滤膜抽滤)。
2、流动相A:(%三乙***,)-乙***(97:3),即970mL水++***+30mL三乙***;流动相B:甲醇。A和B比例为70:10。
3、将配好的流动相超声30分钟,以脱去溶剂中的气泡,防止堵塞色谱柱。
维生素B12的提取:
,加入1mL试剂一,冰浴匀浆,冰水浴超声30 min。8000g离心10min,取上清液,针头式过滤器过滤后待测。操作过程注意低温、避光。。
标准品的配制:
在试剂二中加入1mL试剂一,配成500μg /mL 母液,将母液用试剂一分别稀释成40 μg/mL、30μg/mL、20μg /mL和10 μg /mL的维生素B12标准品溶液。针头式过