文档介绍：常用HPV检测方法的分析
HPV检测的意义
HPV 感染与CIN 和宫颈癌变有着密切的关系
HPV的检测可能对宫颈癌的预后有预测作用
HPV检测对科学研究的价值
常用检测方法
1．细胞学检查；
2. 组织学检常用HPV检测方法的分析
HPV检测的意义
HPV 感染与CIN 和宫颈癌变有着密切的关系
HPV的检测可能对宫颈癌的预后有预测作用
HPV检测对科学研究的价值
常用检测方法
1．细胞学检查；
2. 组织学检查；
3．感染组织中HPV蛋白的检测；
4. HPV感染的血清学检查；
5. HPV基因组检测.
优点与问题
优点：操作简单，价格低廉，适宜作初步筛查；
缺点：凹空细胞是HPV 感染的主要形态学改变，但由于其他病毒感染及人为因素均有可能造成细胞内出现空泡或凹空样变，而且细胞学检查易受取材、染色及细胞病理医生的主观判断等因素的影响，因此应用细胞病理学检测HPV 存在灵敏度低、特异性差、假阴性率和假阳性率高、不能对HPV 进行分型.
组织学检查；
肉眼观察；
***镜观察；
组织检查；
优点与问题
优点：操作简单，价格低廉，适宜作初步筛查；
缺点：准确率低，人员素质要求高，病人痛苦程度大。
感染组织中HPV蛋白的检测
针对HPV抗原，主要是衣壳蛋白制备抗体，通过免疫学方法进行检测。ELISA，免疫沉淀法等。
优点与问题
优点：原理明确，操作相对简单
缺点：由于HPV 至今尚不能在体外培养，且其免疫原性较弱，故血清学方法检测灵敏度较低。
HPV感染的血清学检查
检测人体血清中是否存在有针对HPV产生的抗体，通过免疫学方法进行检测。
优点与问题
优点：原理明确，操作相对简单
缺点：血清学检测的对象是抗原和抗体，由于人体对HPV产生免疫应答有一定的迟滞性，所以血清学检测对无免疫应答者和HPV 潜伏期感染者会产生漏检。
HPV基因组检测
PCR类检测方法
Southern杂交法
原位杂交
杂交捕获法
PCR类检测方法
优点：该方法灵敏度高，
缺点：是容易发生样品间的交叉污染，从而导致假阳性率高。另外利用该方法进行HPV分型操作比较烦琐。
Southern杂交法
优点：该方法灵敏度及特异性均高，适
用于HPV 分型、HPV-DNA分子质量鉴定、基因组酶切图谱建立及物理状态研究等。缺点：其操作麻烦、耗时、费用高，且必须应用新鲜组织标本，故不宜大规模临床使用。
原位杂交
该法利用HPV 探针与组织中的HPV-DNA 杂交，首先将探针和组织中的双链HPV-DNA 变性为单链，然后使探针与组织杂交.
优点：利于病理学分析
缺点：杂交链的稳定性不高，在杂交过程中，部分探针单链复性，使杂交率降低，影响HPV-DNA 的检出率。
杂交捕获法
杂交捕获(hybridcapturesystem，HCS) 实验是美国Digene 公司新发展的一种检测HPV DNA 的技术，其原理是利用对抗体捕获信号的放大和化学发光信号的检测。
基本实验步骤如下：
1. 样本DNA 双链被释放并分解为核苷酸单链;
2. DNA 单链与RNA 探针结合为RNA－DNA 杂交体;
3. 特异性抗体将RNA－DNA 杂交体固定在试管壁或微孔壁上;
4. 结合有碱性磷酸酶的多个第二抗体与RNA－DNA 杂交体结合,使信号放大;
5. 碱性磷酸酶使酶底物发光,判读光的强弱可确定碱性磷酸酶的含量,从而确定RNA－DNA 杂交体的含量。
杂交捕获一代（HC-Ⅰ)试验可检测9 种高危型HPV ,包括16 、18 、31 、33 、35 、45 、51 、52 和56 。所用的反应载体是试管；
杂交捕获二代试验(HC－Ⅱ)原来的试管法改为96 孔平板法，能同时检测13 种高危型HPV (16 、18 、31 、33 、35 、39 、
45 、51 、52 、56 、58 、59 和68) 。
优点：其灵敏度和特异性均较好，
缺点：存在交叉污染、费用昂贵等问题利用该法进行HPV 分型需要将HPV 常见基因型逐个筛选才能最后确定感染的HPV 型别，成本高。
HPV基因芯片检测方法
敏感性高、特异性强、检测结果准确可靠。有研究报道，HPV 基因芯片的检测灵敏度是PCR方法的100 倍。
操作简单：通过1次杂交检测不仅可以判断待检样品中是否存在HPV 感染，而且可以鉴定出是哪种型别的HPV 感染。
针对性强