文档介绍：-
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微生物实验
微生物实验
细菌形态观察
细菌分布
消毒灭菌
细菌形态观察
一、实验目的
掌握光：营养培养基、选择培养基、鉴别培养基
〔2〕根据物理性质：液体培养基、固体培养基和半固体培养基
3． 细菌在培养基中的生长状况：外表生长、均匀浑浊生长、沉淀生长
2. 革兰氏染色：
革兰阳性细菌细胞壁的肽聚糖(peptidoglycan)层较厚，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，通道弯曲，结晶紫与碘的复合物保存在细胞而不被脱色；而革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇处理后孔径仍可使结晶紫与碘的复合物通过，因而将染料洗去而被脱色。
三、实验材料
咽拭子、羊血培养皿：1套/人；大号普通培养皿：1块/2人；载玻片：1片/人； A、B菌：6套/桌；NS：1份/人；滤纸：1/人；消毒液：4套/桌；三角瓶、电天平、营养琼脂、称药纸、称药勺、量筒：1套/桌
四、实验容
1. 培养基制备
1〕按产品要求称取营养琼脂
2〕每实验桌制备200ml
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3〕高压蒸汽灭菌后，在干净工作台倒平皿
4〕所制备的普通平皿用于空气培养
2. 机体不同部位的细菌采样、培养
1〕咽部正常菌群的采样、培养
咽拭子擦拭咽部，平行划线法接种于羊血平皿。
2〕手指消毒前后细菌的采样培养
未消毒手指平行划线法接种于普通平皿；同一手指碘酒、酒精消毒后平行划线法接种于普通平皿。
3. 环境中细菌采样培养
1〕空气培养
将培养皿翻开暴露于空气中，20分钟后盖好平皿盖儿
2〕流通纸币〔或硬币〕的细菌采样培养
将硬币正反面分别在培养基上充分接触
3〕采样完毕后，将培养皿底部朝上放入铁丝筐，统一置培养箱：37℃ 18-24小时
4. A、B、C菌鉴定〔革兰氏染色法〕
1〕. 细菌涂片制备程序：
〔1〕取一干净玻片，火焰上方缓缓通过三次去油
〔2〕蜡笔画线将玻片分割为A、B、C三区域
〔3〕接种环取生理盐水分别滴入A、B两区域各一滴
〔4〕分别取少许A、B 、C菌 ，与生理盐水充分混匀成菌液，风干后形成菌膜
〔5〕固定〔火焰上方缓缓通过三次〕
〔6〕革兰氏染色
〔7〕滤纸吸干水分，油镜观察
2〕. 革兰氏染色：
〔1〕细菌涂片、火焰固定
〔2〕结晶紫初染 1min
〔3〕卢戈氏碘液媒染 1min
〔4〕95%乙醇脱色 30-40s
〔5〕沙黄复染 1min
五、实验结果
A：G+，球菌，推测为金黄色葡萄球菌；
B：G-，短杆菌，推测为大肠杆菌；
六、思考与讨论
1． 影响革兰氏染色的因素：
〔1〕细菌本身因素：
菌龄：如果菌龄太大，可能出现假阴性
〔2〕操作因素
涂片：取菌应适量，涂片要均匀，如果*个局部菌层太厚，可能在脱色时达不到，会导致局部假阳性
固定：固定温度太高或时间太长都会导致细菌构造破坏而出现假阴性；但是固定不够，细菌会在水洗时被冲掉
初染：初染时间虽然说是1分钟，但是可以适