文档介绍：淀粉酶活性测定实验报告
班级：植物092 姓名：徐炜佳 学号：0901080223
淀粉酶活性的测定
一、研究背景及目的
酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性
OD520
项目
α(测)
α(测)
α(对)
α(对)
α+β(测)
α+β(测)
α+β(对)
α+β(对)
OD520
平行组数据均值OD520
样品麦芽糖浓度mg/ml
上表中前4行数据为实验的原始数据。以表中前两行数据绘制标准曲线（见下页），计算上表中第4行数据（各样品的OD值）均值，填入上第5行中，根据标准曲线的方程，计算第5行OD值所对应的麦芽糖浓度，填入最后一行，如上表。
根据以上的数据整理的结果，结合以下公式计算两种淀粉酶的活性：
A——α-淀粉酶测定管中的麦芽糖浓度
A’——α-淀粉酶对照管中的淀粉酶的浓度
B——(α-+β-)淀粉酶总活性测定管中的麦芽糖浓度
B’——(α-+β-)淀粉酶总活性对照管中的麦芽糖浓度
计算结果如下：
α-淀粉酶活性= （毫克麦芽糖•克-1鲜重•分钟-1）
(α-+β-)淀粉酶活性= （毫克麦芽糖•克-1鲜重•分钟-1）
β-淀粉酶活性= （毫克麦芽糖•克-1鲜重•分钟-1）
六、结果分析
七、思考题
1、酶活力测定实验的总体设计思路是什么？实验设计的关键你认为是什么？为什么？
答：利用酶的专一性或酶活力的影响因素抑制除待测酶以外的其它酶活性，通过测酶促反应的产率推算酶活力大小。
关键在于抑制其它酶的活力而不影响测定酶，这样可以减小或避免其它酶产物给测定结果带来的误差。
2、本实验最易产生对结果有较大误差影响的操作是哪些步骤？为什么？怎样的操作策略可以尽量减少误差？
答：①浸提步骤。70℃温度或15min时间控制不严格不准确则可能导致β淀粉酶未完全钝化使测得活性偏大。应严格控制温度和时间。②70℃水浴后需要立即冰浴，否则β淀粉酶复性使测得α淀粉酶活性结果偏大。③向测定管中加入NaOH时应迅速，否则酶与底物继续反应使结果偏大。
3、a-淀粉酶活性测定时70℃水浴为何要严格保温15分钟？保温后为何要立即于冰浴中骤冷？
答：由于b-淀粉酶不耐热，在70℃下处理一定时间可以钝化，严格保温15分钟可以达到理想的钝化效果，时间过长，a-淀粉酶活性也会受到影响；时间不足，b-淀粉酶钝化不完全。保温后立即骤冷是为了通过剧烈的温变改变b-淀粉酶的结构以防止在随后的反应中复性，这样就保证了在随后的40℃温浴的酶促反应中b-淀粉酶不会再参与催化反应。此外我认为冰浴使酶迅速降温，便于严格控制高温处理时间的长短。
4、？各管于40℃水浴准确保温15分钟的作用？
答：酶实验体系的pH值变化或变化过大，会使酶活性下降甚至完全失活。
，同时稳定溶液的pH不至于在反应过程中大幅波动。
40℃水浴准确保温15分钟为调整酶促反应的最适温度
5、众多测定淀粉酶活力的实验设计中一般均采取钝化b-淀粉酶的活力而测a-淀粉酶和测总酶活力的策略，为何不采取钝化a-淀粉酶活力去测b-淀粉酶活力呢？这种设计思路说明什么？
答：β淀粉酶与α淀粉酶的催化特性是有差异的。β淀粉酶主要作用于直链淀粉的α-1，4-糖苷键，而且仅从淀粉分子外围的非还原性末端开始，切断至α-1,6-键的前面反应就停止了；而α淀粉酶则无差别地作用于直链淀粉与支链淀粉的α-1，4-糖苷键，所以β淀粉酶需要α淀粉酶淀粉支链的α-1，4-糖苷键后才能完全体现其催化能力。
此外我认为在实验中温度比酸度更易控制，钝化α淀粉酶难度远远高于β淀粉酶，而且若提高酸度钝化α淀粉酶，则回调最适pH时α淀粉酶也有可能由于复性恢复活力。
这种设计思路说明在测定酶的比活力时要综合考虑各种可能出现的酶的性质以及它们之间的联系，也要考虑到实验操作的可行性。
6、本实验中所设置的对照管的作用？它与比色法测定物质含量实验中设置的空白管有何异同？本实验可否用对照管调分光光度计的100%T？为什么？
答：消除非酶促反应（如淀粉酸性环境下加热水解）和非测定时间内的酶促反应引起的麦芽糖的生成带来的误差。
两种都是为了消除非测定部分对光的吸收，空白组是为了消除溶