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临床检验根底学实验指导
血液常规检验
一、微量吸管的使用、毛细血管采血、计数板的鉴定与使用
【实验目的】:掌握微量吸管的使用、毛细血管采血、计数板的鉴定、构造与使用。
【实验试剂】每升血液中的白细胞数量。
【实验试剂】:白细胞稀释液
【实验器材】: 显微镜、改良Neubauer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒
【实验方法】:准备:取清洁枯燥试管一支,加白细胞稀释液。
采血部位按摩→75%乙醇棉球进展刺针部位皮肤消毒→待酒精挥发干〔否如此血流不成滴〕→自指尖腹内侧迅速刺针→擦去第一滴血→准确吸取20ul血液→用无菌干棉球压住伤口止血→用无菌干棉球擦去管尖外围余血后→将血液轻轻释放到稀释液底部→回吸上清液2-3次→混匀→室温静置至液体变为棕褐色即红细胞破坏完全→清洁计数板、盖玻片→充池→静置2-3min待细胞下沉→低倍镜下计数四角大方格内的白细胞总数→计算→报告。
计算:WBC=四个大方格内的白细胞数〔N〕/4×10×20×106=N/20×109/L
【须知事项】:
1.采血部位应选择皮肤完整,不能有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症。
2.针刺应迅速,深度适宜〔约2-3mm〕。待血液自行流出,擦去第一滴血。
,试管、计数板均须清洁,以免混入杂质被误认为白细胞。
、血液量应准确,以保证稀释倍数。
,每个大方格间白细胞数差异不得超过均值的±10%,否如此要重新充液计数。
,以免人为扩大或缩小计数区域。
,可加大稀释倍数,反之白细胞过低时可计数8个大方格内白细胞数或加大取血量。
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四、白细胞分类计数〔DC〕
【实验目的】:掌握显微镜法外周血分类计数的方法、各种白细胞的镜下形态。
【实验原理】:将血液制备成涂片,经瑞-吉氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进展分类计数。通常分类100个白细胞,计算得出各种白细胞所占百分比。
【实验试剂】:瑞-吉氏复合染液
【实验器材】:显微镜、外周血标本片、香柏油、擦镜纸、清洁剂
【实验方法】:准备:血涂片制备与瑞-吉氏染色待干
低倍镜下选择细胞分布均匀、着色良好的区域→转油镜按一定的规律移动视野,依次进展分类计够100个白细胞→算出各种白细胞的百分比→报告
【须知事项】:
、均匀、头体尾清楚。
,防止主观选择视野。
,不计入100个白细胞内,以分类100个白细胞过程中见到幼红细胞多少个来报告,并应注明其所属阶段,
、血小板的形态染色与其分布情况,注意有无寄生虫〔如疟原虫〕与其他异常所见。
五、白细胞计数〔WBC〕与分类计数(DC)
【实验目的】:掌握白细胞计数与分类计数原理、方法与结果报告
【实验原理】:
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白细胞计数原理:用白细胞稀释液将全血稀释一定的倍数并破坏红细胞,充入血细胞计数池,显微镜下计数一定体积的白细胞数,经换算求出每升血液中的白细胞数量。
白细胞分类计数原理:将血液制备成涂片,经瑞-吉氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进展分类计数。通常分类100个白细胞,计算得出各种白细胞所占百分比。
【实验试剂】:白细胞稀释液、瑞-吉氏复合染液
【实验器材】:显微镜、改良Neubauer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒、载玻片、推玻片、香柏油、擦镜纸、清洁剂
【实验方法】:准备:,。
,边缘光滑清洁推玻片各一X。
采血部位按摩→75%乙醇棉球进展刺针部位皮肤消毒→待酒精挥发干〔否如此血流不成滴〕→自指尖腹内侧迅速刺针→擦去第一滴血→准确吸取20ul血液→用无菌干棉球擦去管尖外围余血后→将血液轻轻释放到稀释液底部→回吸上清液2-3次→混匀→另取血一滴于载玻片的右端→立即推制血膜→用无菌干棉球压住伤口止血→清洁计数板、盖玻片→充池〔静置2-3min待细胞下沉〕→低倍镜下计数四角大方格内的白细胞总数→将干透的血膜进展瑞-吉氏染色→油镜下分类计数→计算→报告。
六、红细胞计数〔RBC〕、Hb测定
【实验目的】:掌握红细胞计数,Hb测定原理、操作方法,规X的报告结果
【实验原理】:
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红细胞计数原理:用等滲稀释液将血液稀释一滴倍数,充入计数池,在显微镜下计数一定体积内的红细胞数,经换算求得内升血液中的红细胞数。
Hb测定〔Hi法〕