文档介绍：Bio-Rad Quantity One 软件应用讲义 5- 1 Quantity One 应用讲义本讲义介绍 Quantity One 的两个重要分析功能:定量分析和分子量确定。 Quantity One 软件 Help ? Quick Guide 快捷指南提示如何实现一个功能, 如定量分析(Volumes Quick Guide) ,电泳条带分析(Band Analysis) ,差显分析(Differential Display Analysis) ,克隆计数(Colony Counting Analysis) 等。快捷指南下有 1,2,3…步骤,根据提示完成。一. 定量分析功能快捷指南 Volumes Quick Guide ,此功能能对任意所选区域进行定量分析, 此分析可以报告 2 个结果:相对浓度和绝对浓度(如有浓度标准样品) 1. 选择成像系统或打开已保存的文件( 软件可以控制 Bio-Rad 所有的成像系统如 GelDoc,ChemiDoc,VersaDoc,GS-800,FX, 如不是 Bio-Rad 成像系统所摄取的图象, 将图象保存为 Tiff 文件格式,软件也可进行分析处理) 2. Zoom Box ,缩放,对图象进行放大观察 3. Transform 转化,调节图象的对比度黑白 4. Volume Rect Tool 矩形区域选择,如 U1 5. Volume Free hand Tool 自由画笔选择区域,可以勾勒出无规则形状,如 U2 6. Volumn Contour Tool 等高线勾勒区域,自动连接浓度浓度相同的点,如 U3 上面 3 种方法选择需要定量的区域。 Bio-Rad Quantity One 软件应用讲义 5- 2 双击所选区域,出现如下窗口,定义样品类型,如未知样品 Unkonwn(U1,U2 …即待计算样品) ,背景 Background(B1,B2 …,软件在算浓度时会将此区域的浓度自动扣除) 或标准样品 Standard ( Std1,Std2, 如果该样品是浓度标准样品,即定量标准,需在浓度 concentration 一栏输入该样品的浓度)。 7. Select Tool 选择不同区域 8. Print Image 打印图像 9. Volume Analysis Report 定量报告结果, 打开出现如下窗口, 选择要报告的参数, 主要有 2 个参数 Volume 和 Concentration 。 Volume 为相对浓度,如有浓度标准样品( Std ) ,软件可报告 Concentration 绝对浓度。 Band Analysis 介绍用此功能对泳道内的所有条带进行分子量确定,相对浓度分析 Bio-Rad Quantity One 软件应用讲义 5- 3 1,2,3 同上 4,5,6 确定泳道 lane, 并可对泳道进行各种调整( 实际实验中泳道往往不是垂直的而出现各种变形。在软件的工具栏中有一 Lane Tool 图标,包含有更多泳道编辑工具。 7. Lane Background 去除泳道背景,建议不做 8. Detect Band ,检测泳道内的条带,打开出现如下窗口,一般可通过调节 sensitivity 灵敏度来调节检测出的条带, 或通过人工编辑来增加/ 减少条