文档介绍：临床基因扩增检验的质量保证
第1页，本讲稿共84页
定 义
质量保证(Quality Assurance,QA) 为一产品或服务满足特定质量要求提供充分可信性所必要的有计划的和系统的措施。 输容器
标本的采集材料如棉签应为一次性使用；
采样及运输容器应为密闭的一次性无菌装置；
采样所用的防腐剂、抗凝剂及相关试剂材料不应对核酸扩增及检测过程造成干扰。
第17页，本讲稿共84页
标本采集中的防污染
采集中要特别注意污染，防止混入操作者的头发、表皮细胞、痰液等；
如使用玻璃器皿，必须经高压灭菌，以使可能存在的RNase失活。
第18页，本讲稿共84页
标本保存
靶核酸(尤其是RNA)易受核酸酶的作用而迅速降解，因此标本的保存对于核酸扩增测定的有效性极为重要。
使用GITC作为稳定剂保存标本，标本可在室温下稳定约7天。
第19页，本讲稿共84页
标本保存
临床体液标本长期保存应在-70℃下。
如为提取核酸后用于DNA扩增分析的样本，可于10 mmol/L Tris,1mmol/L EDTA(～)缓冲液中4 ℃下保存。
用于RNA扩增分析的样本，则应于上述缓冲液中-80℃或液氮下保存。
核酸的乙醇沉淀物则可于-20℃下保存。
第20页，本讲稿共84页
标本运送
样本一经采集，则应尽可能快的送至检测实验室。
样本中如加入了适当的稳定剂,如用于RNA测定加入GITC的血清(浆)样本和用于DNA测定的EDTA抗凝血等,则可在室温下运送或邮寄。
实验室应根据待测靶核酸的特性，对各种临床样本的运送条件作出相应的规定。
第21页，本讲稿共84页
临床基因扩增检验的室内质量控制
测定前的质量控制
核酸样本的制备及其质量控制
统计学质量控制
质量控制的评价
第22页，本讲稿共84页
测定前质量控制
实验室设施、仪器设备及管理
理想的试剂和操作方法
人员培训
第23页，本讲稿共84页
实验室设施、仪器设备及管理
临床基因扩增检验实验室应有充分合理的空间、良好的照明和空调设备 ；
实验室仪器设备应保养良好，实验用品要达到相应的要求。加样器的校准？带滤塞吸头的使用及质检？离心机？热循环仪？水浴箱和/或恒温干浴仪？酶标仪和洗板机？
第24页，本讲稿共84页
基因扩增仪器设备的质控
第25页，本讲稿共84页
带滤塞吸头的使用及质检
首先制备一个含1～2%甘油及色素（如***橙）的水溶液，如果吸头的最大体积为100μl，则将加样器吸取体积调至110～120μl，再套上吸头后吸取上述有色液体。如果吸头质量好，则有色液体不应出现在滤塞之上，否则说明滤塞不严。
第26页，本讲稿共84页
带滤塞吸头的使用及质检
用实验来检验带滤塞吸头的质量：先纯化制备数份强阳性和数份阴性核酸标本，然后将加样器吸取量设至扩增加样所需的体积，使用待评价带滤塞吸头对一份强阳性样本来回吸取10次（模拟10份阳性样本的吸取），将最后一次的吸取液加至一含扩增反应液的管中，之后，换一个新吸头，连续吸取10份阴性样本分别至10个扩增反应管中，此过程重复3～5次，最后对每一管按所用试剂方法进行扩增检测。强阳性样本应为强阳性，阳性弱或出现阴性则说明吸头可能含有扩增抑制物。所有阴性样本应为阴性，出现阳性则表明吸头不能有效地防止气溶胶对加样器的污染。
第27页，本讲稿共84页
核酸提取用离心管质检
离心管PCR抑制物质检
其他
第28页，本讲稿共84页
扩增仪孔间温度的重复性和均一性的检测方法
一是使用一种热电偶探针、微伏转换器和自动图示记录仪组成扩增加热模块孔内温度监测记录系统，当孔间温度变异超出1℃时，其可测出来。
具体做法是将装有TE缓冲液并上加石蜡油的扩增反应管放置于扩增仪各孔中，热电偶探针透过扩增反应管盖插至缓冲液中，然后按程序进行一个常规的PCR扩增，加热模块如为96孔，则至少要测定12孔不同位置孔内的温度，在整个扩增过程中，可移动热电偶探针至上述不同孔中监测温度，但每一孔内温度监测至少要有一个扩增周期。
第29页，本讲稿共84页
扩增仪孔间温度的重复性和均一性的检测方法
第二种方法并非直接测定孔内温度，而是通过扩增功能来间接获知孔间的均一性，即将加有一已知的含一定浓度的阳性质控样本的扩增反应管置于扩增仪各孔中按常规进行扩增检测，观察结果的一致性程度，如果有某一个或几个孔结果有问题，则应确定这一个或几个孔是否会重复性地得到假阴性结果，如果是，则表明相应孔的热传导有损坏。
第30页，本讲稿共84页
理想的试剂和操作方法
试剂盒的质检
定量测定的精密度是测定组成步骤的变异和的平方根(SD)=
上式中SDa、SDb、SDc是步骤a、b