文档介绍：Zhej iang A&FUniversity Dissertation for theDegree ofMaster Cloning of thecrygene inBacillus thuringiensis which has nematicide activity Candiadate:Liu Juan Adviser:Zhang Li—qin,Professor Associate Supervisor:Wang Yong-jun,Associate professor Speciality:Forest Protection DateofSubmission:May 26,2012 Zhej iang A&FUniversity Lin’an,Zhejiang province, May,2012 独创性声明本人声明,所呈交的学位论文,在指导教师指导下,通过我的努力取得的成果,并且是自己撰写的。尽我所知,除了文中作了标注和致谢中已经作了答谢的地方外,论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果,也不包含在浙江农林大学或其他教育机构获得学位或证书而使用过的材料。与我一同对本研究做出贡献的向志,都在论文中作了明确的说明并表示了谢意。如被查有严重侵犯他人知识产权的行为,由本人承担应有的责任。学位论文作者亲毫签名:塑日期: 塑避塑!!宣论文使用授权的说明本人完全了解浙江农林大学有关保留、使用学位论文的规定,即学校有权送交论文的复印件, 允许论文被查阅和借阅;学校可以公布论文的全部或部分内容,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密,在——年后解密可适用本授权书。。(请在方框内打“√”) 学位论文作者亲笔签名:麴茧指导教师亲笔签名: 摘要摘要化学农药在防治农业有害生物方面的应用效果显著,但是由于化学农药的过量使用,环境问题也随之产生。生物农药以其独显的高效低毒的特点,将在农业病虫害防治中得到越来越广泛的应用。苏云金芽孢杆菌制剂是目前研究最为深入,应用最为广泛的生物农药。其产物的结晶伴胞晶体蛋白对磷翅目、半翅目昆虫具有特异的毒杀效果。挖掘我国丰富的Bt资源,筛选出更多具有杀虫活性的Bt茵,分离克隆其编码杀虫蛋白的基因,对构建Bt工程菌,培育转Bt的抗虫植物具有深远的意义。松材线虫是一种林业有害生物,对松树具有毁灭性的危害,它通过松墨天牛进行传播,松树一旦感染上松材线虫,将在很短的时间内死亡。目前,对松材线虫的防治主要是针对其媒介昆虫松墨天牛来进行的,主要以化学防治为主,直接针对松材线虫进行防治难度较大,国内外研究的较少。本实验室从环境中分离出80株苏云金芽孢杆菌,初步筛选出8株对松材线虫具有毒杀作用的菌株,进一步提取这8株菌株的伴孢晶体蛋白,.对松材线虫进行毒力测定,最后筛选出一株对松材线虫具有最强毒杀活性的菌株,命名为ZJFC85菌株。已经知道对松材线虫具有毒杀活性的是ZJFC85菌株编码产生的伴孢晶体蛋白, 为了能为培育出抗松材线虫病的松树树种提供遗产材料,本实验室将克隆出ZJFC85 菌株中能编码产生的伴孢晶体蛋白cry基因。通过查阅文献,设计9对crv基因保守区域的引物,以ZJFC85菌株质粒DNA为模板进行PCR扩展,扩增出一段保守区域序YUcryl, 对cryl基因进行克隆,克隆产物送出测序,测序结果分析该菌株含有crylAa基因,设计crylAa基因的特异性引物,PCR扩增得到crVlAa基因的全长基因,对cryl基因的全长基因进行克隆,得到我们需要的遗产材料。关键词:苏云金芽孢杆菌,松材线虫,伴孢晶体蛋白,cry基因 ABSTRACT ABS瞰CT Chemical pesticides inthe useofcontrolling agricultural harmful pests aresignificant,but due to the excessive useofthem,caused many environmental pesticide used inpest and disease controlled inagriculture willget more andmorewidely,because ofhigh effective and low ,the Btpreparations arethe mostwidely usedbiological show thatcrystal protein ofBthashiigh pestical ,further research will be onourric