文档介绍：浙江大学硕士学位论文不同方案超排卵对小鼠子宫内膜容受性影响的研究姓名:阮恒超申请学位级别:硕士专业:妇产科学(生殖内分泌) 指导教师:黄荷凤;金帆 20040501 ——一一垫!!!塑垩查兰堡主兰竺丝茎叁不同方案超排卵对小鼠子宫内膜容受性影响的研究浙江大学医学院 200]级硕士研究生导师摘要妇产科学阮恒超黄荷凤教授金帆教授背景随着现代辅助生育技术(Assisted reproductivetechnology,ART)的广泛开展,%.1s%的低水平。其中一个重要因素即子宫内膜容受性(uterine receptivity)降低,已成为影响ART成败的主要问题之一。在排卵周期中,子富内膜仅在极短的时间内才允许胚泡植入,称为种植窗期(implantation window)。,即LH高峰后的第7—1 ld。此时子宫内膜表现出最大的胚泡种植容受性。多种调控分子参与了胚胎着床过程,如——自血病抑制因子(1eukemia inhibitory factor, LIF),整合素家族(integrins),胞饮突,降钙素t血管表皮生长因子(VEGF)等。其中整合素 D3和LiF在黄体中期以后(正常月经第19d以后)的子宫内膜中有高表达, 3或LIF基因缺陷均会导致不孕。在子宫内膜种植窗期测定整合素口3和L1F臼口表达可以评估子宫内膜容受性,故均被视为子宫内膜容受性的标志物之~。然而,大部分学者的研究表明,与自然排卵周期相比,在卵巢控制性超排卵周期(controlled ovarianhyperstimulation,COH)中,传统的促排卵方案,)从绝经期促性腺激素(HMG)。GnRH激动剂(GnRHa)是近年 2004年浙江大学硕士学位论文集来广泛应用于临床的辅助促排卵药物,它通过改变天然GnRH十肽氨基酸的第六位和第十位氨基酸位点,使功能增强100倍以上。GnRHa能抑制内源性LH峰,,增加取卵周期成功率。GnRHa长周期方案是目前中最常用的辅助超排卵方案,但一系列研究表明与自然捧卵周期相比,使用GnRHa辅助超排卵并不能完全改善子宫内膜的容受性。GnRHa长周期方案还有诸如:Gn用量大,用药时间延长,OHSS发生率偏高,及由于“flare—up”引起的卵巢黄素化囊肿等副作用。GnRH拮抗剂(GnRHant)是GnRH 类似物的一种,它通过对GnRH十肽结构的多个氨基酸位点作出结构改变,以非天然的氮基酸残基取代原有的天然氨基酸,直接参与竞争促性腺物质细胞膜上的受体,能即时抑制Gn分泌, 抑制过早LH峰的出现,,且Gn用量少,用药时间短,OHSS发生率较GnRHa 长周期方案明显降低。但临床前应用显示,GnRHant辅助超排卵与GnRHa辅助超排卵相比, 临床妊娠率略偏低。因此,有学者对GnRHant在COH中对子宫内膜容受性是否造成负面影响产生争议,但无实验数据支持。研究目的本实验以小鼠为研究对象,设计三种方案超排卵模型,通过比较小鼠种植窗期子宫内膜容受性标志物——自血病抑制因子和整合素e 3mRNA和蛋白的表达,探讨不同超排卵方案对子宫内膜容受性的影响,从而为临床超排卵方案的选择提供理论依据a 研究对象与方法模拟人类超排卵长周期方案,对小鼠进行不同方案超促排卵a根据超排卵方案的不同,按随机表顺序将40只小鼠分为4组,分别为促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa) (GnRHant)组,孕马血清促性腺激素(PMSG)组及对照组, 每组各lO只小鼠。超排卵(对照组捧卵)后48h,处死小鼠,取出子宫。SP免疫组织化学方法确定整合素B 3和LIF在小鼠子宫内膜种植窗期的组织学定位a H-score组织学积分和westem blot方法分别对小鼠子宫内膜种植窗期整合索8 3和LIF蛋白的表达进行半定量和相对定量分析。RT-PCR方法对小鼠子宫内膜整合素p3及LIFmRNA的表达进行相对定量分析。 2 20(:小鼠的动情周期为4天,捧卵一般发生在动情周期第一天晚上, 排卵后典型的***涂片相出现在第二天早上,表现为大量的卵圆形上皮细胞。GnRHa和 ***涂片相消失。 3和LIF在小鼠子宫内膜种植窗期的定位:经SP免疫组织化学法检测,在小鼠子宫内膜种植窗期,整合素D3和LIF的表达均定位子宫内膜腺上皮和腔上皮细胞的胞浆。:(1)小鼠种植窗期子