文档介绍：一、什么是色谱
色谱是一种分离工具，而不是传统意义上的分析仪器。
色谱法也叫层析法，它是一种高效能的物理分离技术，将它用于分析化学并配合适当的检测手段，就成为色谱分析法。
常见的分离方法：
蒸馏、离心、电泳、过滤、超滤、等等。
色谱法的不相溶）；
基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；
流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反；
固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；
化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C18柱（反相柱）以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。
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反相高效液相色谱法
即指流动相的极性大于固定相极性的色谱方法。
在本法中常采用化学键合相作为固定相，流动相采用水—甲醇或水—乙***系统，在反相色谱中，极性强的组分在分离时先流出柱子，极性弱的组分后流出。因此适合于共存组分极性差异较大的样品分析。
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乙***(jīng)
乙***又名******，分子式CH3CN，无色透明液体，密度小于水，，能与水和乙醇等有机溶剂以任意比混溶，易燃，有毒性。
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2、液-固吸附色谱
基本原理：各组分在固定相吸附剂上竞争性吸附与解吸
固定相：固体吸附剂为硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂；
流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。
特点：适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；
缺点：非线形等温吸附，常引起峰的拖尾
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六、色谱柱
液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。
正相柱：多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3--CN,-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。
反相柱：主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的(C18)非极性填料。也有无定型和球型之分。常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3—10 μm之间。
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1. 色谱柱的选择
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2. 本公司使用的柱子
主要特点:
使用过程中柱压稳定，即使长时间使用也不会出现拖尾等异常情况
使用寿命长，清洗频度低，仅为同类产品的15%
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七、样品的前处理
a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、质。
d、利用超声仪脱气。
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八、流动相的配制
a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中 。
b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应。
c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；同时降低柱压，延长液体泵的使用寿命
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡。
f、在流动相配制好后， μm滤膜过滤，并进行脱气。
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九、流动相流速的选择
因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。，流速一般选择1ml／min，，／min为佳。
当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙***的含量)。
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十、检测过程的操作
样品检测前控制平台的准备工作
样品检测时的操作
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十一、HPLC常用操作步骤
1)首先对流动相进行过滤，。
2)对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)正常情况下，先用甲醇冲洗10-20分钟，然后再进入测试用流动相。
4)一般情况下，流动相冲洗20-30分钟后，仪器和基线稳定，方可进样测试。
5)同时进两针标样，-，可正式进